Quantificazione degli interferoni bioattivi di tipo I utilizzando un saggio reporter di fosfatasi alcalina alcalina embrionale secreta

Abstract

Fonte: Bego, M. G. et al., Valutazione del rilevamento innato delle cellule T CD4⁺ infette da HIV-1 da parte delle cellule dendritiche plasmacitoidi utilizzando un sistema di co-coltura ex vivo. J. Vis. Exp. (2015)

Questo video mostra il test della fosfatasi alcalina embrionale secreta utilizzando cellule reporter di interferone-α/β HEK-Blue per quantificare gli interferoni di tipo I (IFN) rilasciati in seguito alla stimolazione di cellule dendritiche plasmacitoidi da parte di cellule T CD4⁺ infette da HIV-1.

Protocol

1. Misurazione dell'IFN bioattivo di tipo I utilizzando cellule reporter HEK-Blue IFN-α/β.

Nota: Queste cellule sono state generate dalla trasfezione stabile di cellule HEK293 con i geni umani STAT2 e IRF9 per ottenere una via di segnalazione IFN di tipo I completamente attiva. Contengono anche il gene reporter della fosfatasi alcalina secreta (SEAP) sotto il controllo del promotore ISG54 inducibile IFN-α/β. La stimolazione di queste cellule con IFN di tipo I attiva la via JAK/STAT/ISGF3 e induce la produzione di SEAP.

1. Mantenere le cellule HEK-Blue IFN-α/β in DMEM integrato con il 10% di FBS. Pi....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Celle MT4	Programma di reagenti NIH AIDS	120	Questo reagente è stato ottenuto attraverso il NIH AIDS Reagent Program, Division of AIDS, NIAID, NIH: MT-4 dal Dr. Douglas Richman.
Celle reporter HEK-Blu IFN-α/β	Invivogen	HKB-IFNAB
Giri di velocità	bisonte europeo	350-000-CL
DMEM	bisonte europeo	319-005-CL
FBS	bisonte europeo	080-150
PHA-L	Sigma-Aldrich	O2769
Kit di isolamento delle cellule T CD4+ II	Myltenyi	Codice 130-091-155
Kit di isolamento di cellule dendritiche plasmacitoidi diamantate II	Myltenyi	130-097-240
QUANTI-Blu	Cedano	REP-QB2
2,5 mg/ml di IgG umane	Sigma-Aldrich	I 4506