Un modello murino Air Pouch per la raccolta dell'essudato infiammatorio indotto da lipopolisaccaridi

Abstract

Fonte: Lu, Q., et al. Rilevamento della migrazione e dell'infiltrazione di neutrofili nei topi. J. Vis. Exp.(2020).

Questo video descrive la procedura per generare una sacca d'aria nel tessuto sottocutaneo dei topi e raccogliere essudati infiammatori in risposta alla somministrazione di lipopolisaccaridi in vivo. Questo video copre anche l'analisi dell'infiltrazione di neutrofili nella sacca d'aria.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Saggio della sacca d'aria

1. Prima iniezione d'aria
   1. Il giorno 0, anestetizzare completamente i topi con isoflurano al 5% per 3 minuti in una camera di anestesia gassosa a una velocità di 2 L/min e mantenere l'anestesia di ciascun topo in una singola unità di respirazione con isoflurano al 2% a una velocità di 0,5 L/min.
      nota: Una profondità sufficiente dell'anestesia è assicurata pizzi....

Risultati

Figura 1: Risultati rappresentativi del test della sacca d'aria. (A) Illustrazione del test della sacca d'aria. (B) Risultati rappresentativi dell'infiltrazione di sottogruppi di leucociti nel test della sacca d'aria. PBS: controllo; LPS: 1 µg/mL LPS. I dati sono presentati come media ± SD.

....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
100% etanolo	Fabbrica chimica di Pechino
100% metanolo	Fabbrica chimica di Pechino
centrifuga conica in polipropilene da 15 mL	Falcone	Falcone
Ago da 23 g x 1 1/4"	Bd	Codice 305120
Ago da 26 g x 3/8"	Bd	Codice 305110
Ago da 30 g x 1/2"	Bd	305106
Siringa da 5 ml	Bd	Z683574
Provetta da centrifuga conica in polipropilene da 50 mL	Falcone	14-432-22
Sistema di anestesia gassosa	ZS Dichuang	ZS-MV-IV
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), 1×			Miscela 90% ddH2O con 10% (v/v) 10×PBS, autoclavato
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), 10×			Sciogliere 16 g di NaCl, 0,4 g di KCl, 2,88 g di Na2HPO4·2H2O, 0,48 g di KH2PO4 (anidro) in 200 mL di ddH2O, regolare il pH 7,4, sterilizzare in autoclave
Lipopolisaccaride (LPS)	sigma	L3012
Tampone di lavaggio nel saggio della sacca d'aria			Diluire 0,5 M EDTA a 10 mM con HBSS

Provetta da