Una tecnica per generare un modello murino di artrite indotta da adiuvante

Abstract

Fonte: Lu, Q., et al. Rilevamento della migrazione e dell'infiltrazione di neutrofili nei topi. J. Vis. Exp. (2020).

Questo video dimostra un metodo per generare artrite indotta da adiuvante in un modello murino. L'adiuvante completo di Freund (CFA) viene iniettato nell'articolazione della caviglia del topo e nelle aree periarticolari. Il CFA attiva il sistema immunitario, portando all'infiltrazione di neutrofili e all'infiammazione esagerata.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Induzione del modello murino di artrite indotta da adiuvante (AA)

1. Sospendere l'adiuvante di Freund completo (CFA) facendo vorticare almeno 5 s, quindi aspirare 100 μL di sospensione in un iniettore di insulina.
   nota: Si consiglia di utilizzare un CFA completamente nuovo negli esperimenti per garantire la sterilità.
2. Anestetizzare i topi come descritto.
3. Segnare la zampa scelta e iniettare 20 μL di CFA nello spazio dell'articolazione della caviglia. Iniettare 20 μl di sospensione in quattro punti periarticolari della zampa scelta (80 μl in totale).
4. Rimuovere i topi dall'unità di respirazione e mettere i topi lavorati in una nuova camera. Monitora i topi per assicurarti che respirino fino a quando non riacquistano la capacità di muoversi.
5. Ogni 3 giorni, valutare il diametro dell'articolazione misurando il diametro dell'articolazione della caviglia utilizzando uno spessimetro tascabile (Figura 1A).
6. Ogni 3 giorni, valutare la gravità dell'artrite in base al criterio di punteggio dell'artrite (Figura 1C): 0, normale, nessuna evidenza di eritema e gonfiore; 1, l'artrite più lieve, eritema e gonfiore lieve confinati ai tarsi o all'articolazione della caviglia; 2, artrite moderata, eritema e gonfiore lieve che si estendono dalla caviglia ai tarsi; 3, artrite grave, eritema e gonfiore moderato che si estendono dalla caviglia alle articolazioni metatarsali; 4, L'artrite, l'eritema e il gonfiore più gravi comprendono la caviglia, il piede e le dita, o anchilosi dell'arto.

Risultati

Figura 1: Risultati rappresentativi del modello murino di artrite indotta da adiuvante (AA). (A) Il diametro dell'articolazione della caviglia è stato misurato utilizzando un misuratore di spessore tascabile. (B) Il gonfiore articolare è stato valutato in base al diametro dell'articolazione della caviglia (n = 7). (C) Immagini di ogni punteggio di ar...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
centrifuga conica in polipropilene da 15 mL	Falcone	14-959-53A
Ago da 23 g x 1 1/4"	Bd	Codice 305120
Ago da 26 g x 3/8"	Bd	Codice 305110
Ago da 30 g x 1/2"	Bd	305106
Coadiuvante completo di Freund, 10 mg/ml	sigma	1002036152
Eppendorf Microprovette, 1,5 mL	sigma	Z606340
Misuratore di spessore a quadrante	Mitutoyo	7301
Shu Rui U40 Ago per iniezione di insulina sterile monouso 1 mL	Bd	328421

Provetta da