Incannulamento dell'arteria carotide in un modello di ratto

Abstract

Fonte: Trevaskis, N. L. et al., Il modello di ratto cannulato del dotto linfatico mesenterico: applicazione alla valutazione del trasporto linfatico intestinale dei farmaci. J. Vis. Exp. (2015)

In questo video, dimostriamo una procedura chirurgica per incannulare l'arteria carotide sinistra in un modello di ratto.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Incannulamento dell'arteria carotide

L'incannulamento dell'arteria carotide può essere eseguito prima o dopo l'incannulamento del dotto linfatico mesenterico. Alcuni operatori preferiscono incannulare l'arteria carotide prima di incannulare il dotto linfatico in modo da ridurre il potenziale spostamento della cannula linfatica durante lo spostamento dell'animale.

1. Posizionare un segno sulla cannula dell'arteria carotide a 2,5 cm dalla punta smussata per identificare la parte del tubo da inserire nell'arteria. Collegare l'altra estremità della cannula (cioè senza smusso) a un ago da 23 o 25 G collegato a una siringa riempita con soluzione anticoagulante e riempire la cannula con la soluzione anticoagulante assicurandosi che non siano presenti vuoti d'aria.
2. Per facilitare l'incannulamento, posizionare il ratto anestetizzato in decubito dorsale con il collo teso e la testa rivolta verso l'operatore. Si noti che alcuni operatori preferiscono eseguire questa tecnica con la coda del ratto rivolta verso l'operatore.
3. Praticare un'incisione longitudinale di 1 - 1,5 cm attraverso lo strato cutaneo sopra la trachea sinistra nel piano sagittale.
4. Sezionare il tessuto connettivo sottocutaneo utilizzando una pinza a punta smussata per esporre i muscoli del collo accoppiati sottostanti.
5. Ritrarre i muscoli del collo per rivelare l'arteria carotide sinistra (situata ~1 cm sotto la superficie della pelle e pulsante). Pulire il tessuto connettivo sovrastante dall'arteria mediante dissezione smussata.
6. Isolare accuratamente una sezione di ~ 1 cm dell'arteria utilizzando una pinza per tessuto smussato, facendo attenzione a non danneggiare il tratto nervoso vagale adiacente. Eseguire questa operazione aprendo e chiudendo verticalmente la pinza a punta smussata lungo entrambi i lati dell'arteria per liberarla dal tessuto circostante e dal nervo vago.
7. Usando una pinza a punta fine, infilare due suture di seta sotto l'arteria carotide e posizionarle a ciascuna estremità della sezione dell'arteria isolata. Legare la sutura più vicina all'operatore e più lontana dal cuore e dalla clavicola del ratto (Figura 1A).
8. Occludi il flusso sanguigno attraverso l'arteria posizionando un paio di pinze a punta fine diritte sotto l'arteria (Figura 1B).
9. Usando le forbici dell'iride a punta fine, posiziona una piccola incisione sulla superficie superiore dell'arteria (a circa 1/3 della discesa dalla parte superiore dell'area isolata). Sciacquare il sangue versato sulla superficie dell'arteria con soluzione fisiologica eparinizzata e strofinare delicatamente con punte di cotone.
10. Inserire la punta della cannula nell'arteria con un paio di pinze a punta curva. Una volta inserita, rimuovere la pinza a punta sottile diritta che occlude il flusso sanguigno e far avanzare la cannula di 2,5 cm nell'arteria utilizzando due paia di pinze, una per tenere la cannula all'interno dell'arteria per impedire al sangue di fuoriuscire e l'altra per inserire la cannula.
11. Utilizzare una piccola pinza arteriosa per tenere la cannula all'interno dell'arteria e rimuovere le pinze a punta sottile diritte che sono state posizionate sotto l'arteria nel passaggio 1.8 per occludere il flusso sanguigno.
12. Confermare la pervietà della cannula iniettando una soluzione anticoagulante nella cannula e prelevando una piccola quantità di sangue (Figura 1C). Quindi sciacquare la cannula con una soluzione anticoagulante e sigillare l'estremità utilizzando la fiamma di un accendino o di un tappo per cannula.
13. Legare la cannula in posizione con le due suture poste sotto l'arteria al punto 1.8.
14. Rimuovere il morsetto dell'arteria e fissare una terza sutura attorno all'arteria e alla cannula. Chiudere la ferita del collo con punti di sutura.

Risultati

Figura 1. Fotografie di (A) l'arteria carotide isolata con due suture di seta con quella più vicina all'operatore legata, (B) l'arteria carotide isolata e il flusso sanguigno occluso con un paio di pinze a punta sottile diritte poste sotto l'arteria e (C) un'arteria carotide con la cannula in posizione e la pervietà controllata prelevando una piccola...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Soluzione salina sterile	Baxter sanità	AHB 1307	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui sono le sacche saline Baxter da 100 ml, scatola da 50
70 % di etanolo nell'acqua	qualunque		È possibile utilizzare qualsiasi marca
Eparina (35000U.I. in 35 mL)	Sigma Pharmaceuticals	Codice 337220	http://sigmaco.com.au/
Cannula in polietilene (PE) d.e. 0,96 mm x d/i.d. 0,58 mm	Prolunghe per microtubi	PE8050	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è il tubo in PE 0,8x0,5 mm, 30 m
Cannula in polietilene (PE) d.e. 0,8 mm x d.i. 0,5 mm	Prolunghe per microtubi	PE9658	È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio è un tubo in PE 0,96x0,58 mm, 30 m
righello	qualunque		È possibile utilizzare qualsiasi marca
Marcatori	qualunque		È possibile utilizzare qualsiasi marca
accendino	qualunque		È possibile utilizzare qualsiasi marca
Ferri calibro 23	Livingstone Internazionale	DN23GX0,75LV	È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio è l'ago monouso Livingstone, sterile, 23GX0,75 pollici, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6&ricerca=DN23GX0.75LV
Ferri da 25 gauge	Livingstone Internazionale	DN25GX1.0LV	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è l'ago usa e getta Livingstone, sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
Siringa da 1 ml	Livingstone Internazionale	T3SS01TA	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è la siringa Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
Siringa da 10 ml	Livingstone Internazionale	T3SS10SA	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è la siringa Terumo 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Tamponi di garza	Livingstone Internazionale	GSC075	Qualsiasi marca può essere utilizzata e tagliata alla dimensione richiesta. Esempio qui è la garza tampone di cotone riempito 7,5x7,5 cm, 8 strati. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Bastoncini cotonati	Livingstone Internazionale	CTAST075DP	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è l'applicatore in cotone Livingstone in plastica a doppia punta. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP
Sutura in seta	Livingstone Internazionale	DTSK163019F4
Lame per bisturi	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice 10020-00	È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio qui è la lama per bisturi FST #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Manico del bisturi	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice 10004-13	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x Piccole forbici chirurgiche	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice 14060-09	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui sono le forbici fini FST, 9 cm con tagliente da 21 mm, affilate, dritte. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x Pinze con punta curva seghettata	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice 11001-13	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è una pinza FST da 13 cm con punta curva da 2,8x1,4 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
1 x Forbici per iridectomia	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice 15000-08	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui sono le forbici a molla FST Vannas - tagliente da 2,5 mm, dritte. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16
1 x pinza con punta diritta serata	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice: 11650-10	È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio è FST Graefe 10 cm dritto con punta seghettata 1 x 0,99 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32
1 x pinza con punta fine dritta liscia e affilata	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice 11251-10	È possibile utilizzare qualsiasi marca. L'esempio qui è la pinza FST Dumont #5 dritta da 11 cm con punta da 0,08 x 0,04 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29
1 x pinza con pinza curva fine liscia	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice 11063-07	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è la pinza delicata FST da 9 cm con punta liscia da 0,4 x 0,3 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360
1 x supporto per ago da sutura	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice: 12001-13	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è il porta-aghi Hasley FST da 13 cm con punta da 16 mm di lunghezza x 1,9 mm di larghezza. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70
1 x morsetto per arteria	Strumenti per la scienza fine (FST)	Codice: 18050-28	È possibile utilizzare qualsiasi marca. Esempio qui è FST Bulldog Serrefines dritto, 28 mm di lunghezza, dimensioni della ganascia 9x1,6 mm con pressa a pinza media. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82