Stabilire un modello murino di carcinoma polmonare pleurico disseminato

In questo articolo

Abstract

Fonte: Yasui, H., et al. Fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso per modelli murini di disseminazione pleurica. J. Vis. Exp. (2021)

Questo video dimostra un metodo per generare un modello murino di disseminazione pleurica iniettando una sospensione di cellule tumorali polmonari nella cavità toracica di un topo immunodeficiente.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Generazione di un modello di disseminazione pleurica

Preparare le cellule bersaglio che esprimono la luciferasi e sospendere 1,0 × 10⁶ cellule bersaglio in 100 μL di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)
nota: Le cellule tumorali intratoraciche come il cancro ai polmoni e il MPM sono adatte come cellule bersaglio. Le cellule che esprimono la luciferasi sono state preparate tramite trasfezione genica della luciferasi e l'alta espressione della luciferasi è stata confermata dopo > 10 passaggi cellulari. Le cellule sono state coltivate in un terreno integrato con il 10% di penicillina sierica fetale bovina (100 UI/mL) e streptomicina (100 mg/mL). Il numero di cellule è stato aggiustato in base al tasso di crescita del tumore e al decorso temporale del trattamento (1,0. × 10, 5-6,0 × 10,⁶ cellule/peso corporeo).
Preparare topi nudi femmina omozigote atimica di 8-12 settimane, con un peso corporeo preferibile di 19-21 g.
Anestetizzare i topi durante la procedura con isoflurano (introduzione: 4-5%, mantenimento 2-3%); premere la coda con una pinzetta per confermare che non vi sia alcuna reazione.
Realizzare un tappo con polistirene espanso e attaccare il tappo all'ago da 30 G in modo che la punta rimanga a 5 mm per evitare lesioni polmonari. Piegare la punta dell'ago con una pinza pulita o premendola contro un oggetto duro pulito con il 70% di EtOH per evitare lo pneumotorace (Figura 1).
cautela: Fare attenzione a non forarsi. Usa una pinza per piegare l'ago. Non tenere il tappo quando lo si attacca all'ago. È più sicuro infilare il tappo prima di riempire le cellule nella siringa.
Riempire una siringa (1 ml) con cellule bersaglio e collegare un ago da 30 G con un tappo.
Disinfettare il torace dell'animale con il 70% di EtOH prima della procedura.
Forare un ago nel petto del topo attraverso lo spazio intercostale. A causa della resistenza durante l'urto contro le costole in quel momento, la punta dell'ago si muoveva su e giù. Dopo aver attraversato lo spazio intercostale, premere la siringa contro il topo e iniettare 100 μL di cellule bersaglio (Figura 2).
nota: Il topo respira profondamente quando l'ago entra correttamente nella cavità toracica. Con la flessione della punta dell'ago, si potrebbe evitare lo pneumotorace e l'iniezione inappropriata di cellule nel polmone><. nota: Si raccomanda la puntura della parete toracica destra per evitare il rischio di puntura della parete cardiaca.
Arrotolare il topo 2-3 volte per diffondere le cellule in tutta la cavità toracica.
Rimetti il mouse in una gabbia pulita e calda e monitoralo fino all'ambulatorio. Dopo la procedura, il topo si sveglierà dall'anestesia e si comporterà normalmente.

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Risultati

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Figura 1: Dispositivo facile da realizzare a mano per il trapianto di cellule. Attacca il tappo in polistirene espanso all'ago 30G in modo che la punta rimanga a 5 mm. La punta dell'ago deve essere piegata per evitare lo pneumotorace.

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Figura 2: Iniezione di cel...