Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Valutazione delle caratteristiche dell'occhio secco
Misura il danno corneale con la colorazione con fluoresceina.
<ol>
	<li>Aggiungere 2 μl di fluoresceina allo 0,2% alla cornea del ratto. Aprire e chiudere passivamente le palpebre del ratto 3 volte con un dito guantato per stendere il colorante fluoresceina sulla superficie dell'occhio.</li>
	<li>Dopo 1 minuto, aspirare 1 mL di soluzione fisiologica con una siringa da 3 mL (senza alcun attacco dell'ago), posizionare la siringa a circa 2-3 mm anteriormente alla cornea e spingere delicatamente la soluzione salina sull'occhio.</li>
	<li>Acquisire immagini sotto il filtro blu cobalto (cioè ~400 nm) di un microscopio per immagini oculari con le luci di sfondo spente. 
	nota: Le immagini sono state successivamente analizzate con un sistema di classificazione modificato rispetto alle pubblicazioni precedenti. Le immagini sono state quindi analizzate classificando soggettivamente il numero, l'area e l'intensità delle macchie verdi da 0 a 2, dove 0 indica la loro assenza, 1 indica una colorazione puntiforme di meno di 50 macchie e 2 indica una colorazione puntiforme di oltre 50 macchie.</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagente</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soluzione di fluoresceina sodica</td>
			<td>Bausch & Lomb Regno Unito Limited</td>
			<td>Na</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>attrezzatura</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscopio con illuminatore anulare e fotocamera</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Na</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

colorazione con fluoresceina in un modello di ratto autoimmune con occhio secco per esaminare il danno corneale

Fonte: Hou Ahiua, et al. <a href="https://app.jove.com/v/55592">Un modello di ratto autoimmune cronico con occhio secco con aumento delle cellule T della memoria effettrice nel tessuto del bulbo oculare.</a> J.Vis. Exp. (2017)
Questo video dimostra la colorazione della cornea danneggiata utilizzando il colorante fluoresceina per valutare l'entità della malattia autoimmune dell'occhio secco in un modello di ratto. Le macchie verdi di fluorescenza delle fibre di collagene colorate indicano che le cellule epiteliali corneali sono danneggiate.

Colorazione con fluoresceina in un modello di ratto autoimmune con occhio secco per esaminare il danno corneale

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. ...

Inizia con un ratto anestetizzato che presenta sintomi di malattia autoimmune dell'occhio secco.
Applicare una quantità appropriata di colorante alla fluoresceina sulla cornea del ratto.
Chiudi e apri la palpebra del ratto per assicurarti che la fluoresceina si diffonda uniformemente sulla cornea.
Lascia che il colorante si depositi e aderisca alla cornea.
Nella malattia autoimmune dell'occhio secco, le cellule immunitarie prendono di mira e attaccano erroneamente le ghiandole lacrimali, diminuendo la produzione di lacrime.
Ciò porta all'essiccazione dell'epitelio corneale e al danneggiamento della membrana di Bowman sottostante, una zona acellulare anteriore allo stroma.
Le molecole di fluoresceina permeano attraverso le barriere corneali danneggiate per raggiungere lo strato stromale sottostante ricco di collagene.
Qui, le molecole di fluoresceina si legano al collagene, provocando la colorazione delle fibre di collagene.
Utilizzando una tecnica di imaging appropriata, acquisire immagini della cornea colorata.
Analizza il numero, l'area e l'intensità delle macchie fluorescenti verdi per misurare l'entità del danno corneale.

Utilizzare la scansione con fluoresceina per misurare il danno corneale aggiungendo 2 microlitri di fluoresceina allo 0,2% alla cornea del ratto. Con un dito guantato, apri e chiudi passivamente le palpebre del ratto tre volte per stendere il colorante fluoresceina sulla superficie dell'occhio.
Dopo 1 minuto, utilizzare una siringa da 3 millilitri per aspirare 1 millilitro di soluzione fisiologica. Quindi, posizionare la siringa a circa 2 o 3 millimetri anteriormente alla cornea e applicare delicatamente la soluzione salina sull'occhio. Con le luci di sfondo spente, acquisire immagini sotto il filtro blu cobalto di un microscopio per immagini oculari.

fluorescein-staining-an-autoimmune-dry-eye-rat-model-to-examine

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunology

Immunopathology

Assay and Analysis

Fluorescein Staining in an Autoimmune Dry Eye Rat Model to Examine Corneal Damage

1.3K Views. Inizia con un ratto anestetizzato che presenta sintomi di malattia autoimmune dell'occhio secco. Applicare una quantità appropriata di colorante alla fluoresceina sulla cornea del ratto. Chiudi e apri la palpebra del ratto per assicurarti che la fluoresceina si diffonda uniformemente sulla cornea. Lascia che il colorante si depositi e aderisca alla cornea. Nella malattia autoimmune dell'occhio secco, le cellule immunitarie prendono di mira e attaccano erroneamente...

Colorazione con fluoresceina in un modello di ratto autoimmune con occhio secco per esaminare il danno corneale

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Name	Company	Catalog Number
Reagente
Soluzione di fluoresceina sodica	Bausch & Lomb Regno Unito Limited	Na
attrezzatura
Stereomicroscopio con illuminatore anulare e fotocamera	Carl Zeiss	Na