Saggio di adesione in vitro per rilevare l'aderenza delle cellule tumorali alle trappole extracellulari dei neutrofili

In questo articolo

Abstract

Najmeh, S., et al. Isolamento e manipolazione semplificati di trappole extracellulari per neutrofili umani (NET). J. Vis. Exp. (2015)

In questo video, dimostriamo un test che utilizza la microscopia a fluorescenza per rilevare l'adesione delle cellule tumorali alle trappole extracellulari dei neutrofili (NET). Nei pozzetti di prova, c'è un notevole aumento del numero di cellule tumorali marcate in fluorescenza che aderiscono ai NET, mentre i pozzetti trattati con DNasi mostrano una ridotta adesione delle cellule tumorali ai NET.

Protocollo

1. Saggio di adesione statica delle cellule tumorali NET-

Aggiungere 100 μl della pasta NET precedentemente ottenuta per pozzetto in una piastra a fondo piatto da 96 pozzetti e lasciare rivestire i pozzetti O/N a 4 °C al buio.
Tra le 12 e le 20 ore successive, verificare al microscopio la formazione di un monostrato uniforme di NET privi di cellule sul fondo dei pozzetti (Figura 1). A questo punto, aspirare delicatamente tutto il materiale non aderente fuori dai pozzetti, facendo attenzione a non rompere il monostrato NET sul fondo.
Aggiungere 100 μl di soluzione bloccante dell'albumina sierica bovina (....

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Risultati

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Figura 1. NET Monolayer. Le immagini al microscopio ottico dei pozzetti a piastre a 96 pozzetti rivestiti con NET mostrano (A) un monostrato uniforme di NET in tutto il pozzetto rispetto a (B) un rivestimento inadeguato del pozzetto con uno strato interrotto di NET. Le barre della scala rappresentano 40 μm.