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Rilevamento del legame della vitronectina alle superfici batteriche mediante citometria a flusso

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Fonte: Singh, B. et al., Saggi per studiare il ruolo della vitronectina nell'adesione batterica e nella resistenza al siero.J. Vis. Exp.(2018)

Questo video dimostra il rilevamento dell'interazione della vitronectina con le proteine di superficie batteriche. L'analisi di citometria a flusso misura il segnale di fluorescenza di anticorpi marcati in fluorescenza legati alla vitronectina, confermandone la presenza sulla superficie batterica. Questa tecnica fornisce informazioni sulle interazioni ospite-patogeno e sulle potenziali terapie per le infezioni batteriche.

Protocol

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1. Analisi di Vitronectina, Vn come ligando proteico di superficie batterica

  1. Rilevamento del legame Vn sulla superficie batterica mediante citometria a flusso
    nota: Nella citometria a flusso, abbiamo utilizzato la dispersione laterale e la dispersione diretta per il gate degli eventi positivi. Per esaminare le interazioni con Vn, sono stati selezionati isolati clinici di Hif di tipo f e Hif (n=10) insieme a E. coli BL21 (DE3) come controllo negativo (Figura 1A).
    1. Colture Hif isolati clinicamente in terreno di infusione cervello-cuore (BHI) integrato con ....

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Results

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Figura 1: Il sierotipo f di Haemophilus influenzae lega Vn attraverso il PH espresso in superficie.(A) Risultati della citometria a flusso che mostrano il legame di Vn alle cellule degli isolati clinici di Hof. Ogni isolato clinico (5 x 10,6 CFU) è stato incubato con 250 nM di Vn umano. Il ligando legato è stato rilevato utilizzando pAb anti-Vn di.......

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Disclosures

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Provetta da 5 mL in polistirene a fondo tondo Falco BDCodice 60819-138Stile da 12 × 75 mm
Albumine sieriche bovine (BSA)Sigma-AldrichCodice: A2058Adatto per colture cellulari
Citometro a flusso BD Bioscienze651154Grado di analisi cellulare per applicazioni di ricerca
Vitronectina (Vn) dal plasma umanoSigma-AldrichV8379-50UGGrado di coltura cellulare
Ospite di E. coli (E. Coli BL21)NovagenCodice 69450-3Ospite di espressione proteica
Anticorpi anti-pecora dell'asino coniugati con FITC AbD SerotecSTAR88FPoliclonale
Anticorpi Vn anti-umani di pecoraAbD SerotecAHP396Policlonale

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Vitronectin BindingFlow CytometryBacterial SurfaceAnti vitronectin AntibodiesFluorescence SignalWild type BacteriaMutant StrainProtein HSecondary AntibodiesCentrifugation Wash

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