Una procedura di taglio della coda di topo per la raccolta del sangue periferico e l'isolamento del plasma

Abstract

Fonte: Coats, J. S. et al., Espressione di citochine esogene in xenotrapianti derivati da pazienti tramite iniezione con una linea cellulare stromale trasdotta da citochine. (2017)

In questo video, dimostriamo una procedura di taglio della coda in un modello murino per raccogliere sangue periferico. Il sangue raccolto viene successivamente sottoposto a centrifugazione per separare il plasma, che può essere utilizzato per ulteriori esperimenti.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Raccolta seriale di sangue e monitoraggio del plasma per citochine umane esogene nei topi

1. Prelievo di sangue tramite cesoie per coda
   1. Disinfettare il cappuccio di biosicurezza e assemblare il sistema di ritenuta per topi, le forbici e altri strumenti/forniture per la procedura.
   2. Posizionare il mouse in un sistema di ritenuta e fissare il tubo per ridurre al minimo il movimento del mouse.
   3. Disinfettare la coda e le forbici chirurgiche con alcol isopropilico. Applicare una crema anestetica topica sulla coda.
   4. Usando forbici chirurgiche molto affilate, taglia circa 0,5 - 1 mm della punta della coda del topo. Raccogliere circa 80 μL di sangue periferico utilizzando tubi capillari eparinizzati.
      nota: Se il sangue verrà raccolto con questo metodo più di sei volte, la rimozione della coda dovrebbe essere conservativa rispetto alla quantità di coda rimossa. Man mano che le cesoie avanzano lungo la coda, il diametro aumenta, le emorragie sono più veloci e la guarigione richiede più tempo.

2. Separazione del plasma

1. Trasferire il sangue utilizzando una siringa a bulbo (per espellerlo dai tubi capillari) in una provetta per microtainer con EDTA K₂marcata; capovolgere 20 volte per prevenire la coagulazione><. nota: In genere, la coagulazione del sangue dal morso della coda è veloce. Tuttavia, se l'emorragia persiste per più di ~ 2 minuti, utilizzare una matita/polvere emostatica per favorire la coagulazione.
2. Centrifugare le provette per il prelievo del sangue secondo le istruzioni del produttore e aliquotare il plasma per la conservazione (-20 °C) fino al momento dell'analisi successiva.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Nano transponder impiantabile per animali con canula	Trovan	ID-100B(1.25)
Crema anestetica alla lidocaina EMLA (ottenuta per prescrizione presso la struttura di cura degli animali)	prescrizione	prescrizione
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 Siringa da insulina 28G1/2	Bd	#329461
Tubi BD Microtainer con K2EDTA	Bd	#365974
centrifuga	Beckman Coulter	Alegra X-15R
Tubi capillari FisherBrand (eparinizzati)	Fisher Scientifico	22-260-950
Emocitometro	pescatore	02-671-6
Analizzatore MACSQuant 10	Miltenyi Biotec	Codice 130-096-343
Gabbia per torte di topi	Braintree Scientifico, Inc.	Pannello MPC-1
Limitatore dell'illuminatore della coda del mouse	Braintree Scientifico, Inc.	MTI STD
Implanter con impugnatura a pistola	Trovan	IM-300 (1,25)
"Topi NSG" annuiscono. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, maschio o femmina, età 6 – 8 settimane	JAX Mouse	# 005557