Una tecnica in vitro per la generazione di cellule T apoptotiche mediata dall'irradiazione UV

Abstract

Fonte: Hodge, M. X., et al. Valutazione in vivo dell'efferocitosi dei macrofagi alveolari a seguito di esposizione all'ozono. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video dimostra un metodo per indurre l'apoptosi nelle cellule Jurkat - una linea cellulare di leucemia di linfociti T umani. Le cellule sono esposte alle radiazioni ultraviolette C (UVC), che causano ingenti danni al DNA e portano alla morte cellulare apoptotica.

Protocollo

1. Preparazione della linea cellulare Jurkat T (Giorno 2)

NOTA: Tutte le procedure devono essere condotte in una cabina di sicurezza biologica di classe II.

1. Coltura di cellule T Jurkat in 24 mL di terreno di coltura cellulare basale + 10% FBS + 5% penicillina/streptomicina a 37 °C + 5% CO₂ (Tabella dei materiali). Le cellule T Jurkat sono una linea cellulare in sospensione che può essere mantenuta passando 1:6-1:8 in terreni di coltura preriscaldati ogni 3 giorni. Non agitare.
2. Per preparare le cellule apoptotiche, farle crescere fino al 90% di confluenza in ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Kit Annexin V-FITC	Trevigen	4830-250-K	Il kit TACS Annexin V-FITC consente un'identificazione rapida, specifica e quantitativa dell'apoptosi nelle singole cellule quando si utilizza la citometria a flusso.
Cellule T Jurkat BCL2	ATCC	ATCC CRL-2899	La linea cellulare BCL2 Jurkat è stata derivata trasfettando cellule T umane Jurkat con il vettore di espressione pSFFV-neo mammifero contenente l'inserto ORF BCL-2 umano e un gene resistente alla neomicina. È stato per modelli di misurazione dell'efferocitosi.
Contacellule automatizzato Countess II	Thermofisher	AMQAX1000	Si tratta di una piattaforma di analisi da banco dotata di ottiche all'avanguardia, messa a fuoco automatica completa e software di analisi delle immagini per la valutazione rapida delle cellule in sospensione. Molto facile da usare.
Citocentrifuga Cytospin 4	Thermofisher	A78300003	Fornisce preparazioni economiche a strato sottile da qualsiasi matrice liquida, in particolare fluidi ipocellulari come il liquido di lavaggio broncoalveolare.
Siero fetale bovino, qualificato, inattivato a caldo	Thermofisher	16140071	Fornisce nutrienti alle cellule in coltura per la loro crescita. È lo standard per la coltura cellulare.
Penicillina-Streptomicina	Sigma/Aldrich	P0781-100ML	La penicillina-streptomicina è la soluzione antibiotica più comunemente usata per la coltura di cellule di mammifero. Inoltre, viene utilizzato per mantenere le condizioni di sterilità durante la coltura cellulare.
RPMI 1640 Medium, GlutaMAX Supplemento	Thermofisher	61870036	RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) è stato originariamente sviluppato per coltivare cellule leucemiche umane in sospensione e come monostrato. Da allora il terreno RPMI 1640 è stato trovato adatto per una varietà di cellule di mammifero, tra cui HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrociti e carcinomi. Aiuta a far crescere le cellule T Jurkat in modo rapido ed efficiente.
Stratagene UV Stratalinker 1800 UV reticolante	Cambridge Scientific	Codice: 16659	Il reticolante UV Stratalinker è progettato per indurre apoptosi, reticolare DNA o RNA in membrane di nylon, nitrocellulosa o nitrocellulosa rinforzata con nylon.