Imaging di fase quantitativo tridimensionale per la caratterizzazione di sottotipi di linfociti

Abstract

Fonte: Yoon, J. et al. Identificazione senza etichetta di sottotipi di linfociti utilizzando l'imaging di fase quantitativo tridimensionale e l'apprendimento automatico. (2018)

Questo video dimostra l'identificazione senza marcatura della morfologia e della biochimica dei linfociti attraverso l'imaging di fase quantitativa 3D. Questa tecnica consente un'analisi approfondita dei linfociti, scoprendo le loro strutture e proprietà interne senza la necessità di procedure di marcatura.

Protocol

1. Citometria a flusso e ordinamento dei sottotipi di linfociti

NOTA: Ordinare i linfociti in base al tipo di cellula è essenziale per stabilire le etichette del tipo di cellula di base (cioè corrette) per addestrare e testare un classificatore di tipo di cellula nell'apprendimento supervisionato. La citometria a flusso, un metodo gold standard, viene utilizzata per identificare e separare i linfociti.

1. Preparare una miscela di anticorpi di colorazione dei marcatori di superficie in 100 μL di terreno RPMI-1640 fresco [con il 10% di FBS, 0,1 μg di CD3e (17A2), CD8a (53-6,7), CD19 (1D3), CD45R (B220, RA3-6....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Citometria a flusso	BD Bioscienze	Aria II o III
Camera di imaging	Tomocube, Inc.	TomoDish
Olotomografia	Tomocube, Inc	HT-1H
Software di imaging olotomografico	Tomocube, Inc.	TomoStudio
Software di elaborazione delle immagini	MathWorks	Matlab R2017b
Provetta da centrifuga conica Falcon	ThermoFisher Scientifico	14-959-53A	15 ml
Soluzione salina tamponata con fosfati	Sigma-Aldrich	806544-500ML
Tampone lisano ammonio-cloruro-potassio	ThermoFisher Scientifico	A1049201
RPMI-1640 medio	Sigma-Aldrich	Codice: R8758
Siero fetale bovino	ThermoFisher Scientifico	10438018