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Articolo metodologico
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8 luglio 2025
Fonte: Neuhaus, V. et al., Valutazione degli effetti citotossici e immunomodulatori delle sostanze nelle fette di polmone umano tagliate con precisione. J. Vis. Exp. (2018)
In questo video, descriviamo una procedura per gonfiare polmoni umani isolati con agarosio e preparare fette di polmone umano tagliate con precisione. Le fette polmonari ex vivo preparate possono essere utilizzate per ulteriori esperimenti immunologici.
Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.
1. Preparazione generale di PCLS umani e successiva esposizione a sostanze chimiche
NOTA: Sono necessarie due persone per riempire un polmone. Si raccomanda un libretto di vaccinazione aggiornato per l'epatite A e B. I pazienti vengono sottoposti a screening di routine per l'HCV e l'HIV prima del trapianto di polmone. Se viene diagnosticata o sospettata un'infezione attiva da Mycobacterium tuberculosis, il polmone deve essere respinto. Tuttavia,....
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Tubo flessibile in silicone 3,0 x 5,0 mm | A. Hartenstein (Lipsia, Germania) | PE04 | |
| siringa | Faust Lab Science (Klettgau, Germania) | 9.410 050 | |
| Utensili per carotaggio | Personalizzato | Personalizzato | |
| Manico della lama di taglio (FEATHER) | pfm medical ag (Colonia, Germania) | 205530001 | |
| Lame di rifilatura (FEATHER) | pfm medical ag (Colonia, Germania) | Codice 205500000 | |
| Microtomo: Affettatore di tessuti | Alabama R&D (Bad Homburg, Germania) | 303400-ADPT | Affettatrice per tessuti Krumdieck (MD6000) |
| Lama per microtomo | Spada Wilkinson (Solingen, Germania) | ENR-4027800011506 | |
| Piastre per coltura tissutale | Sigma (München, Germania) | Z666246-420EA | |
| Ansa di inoculazione | Copan Diagnostics (Murrieta, Stati Uniti) | CD176S01 | |
| Piastre per coltura tissutale TPP 24wells | Sigma (München, Germania) | Z707791-126EA | |
| cassetta | Thermo Scientific (Schwerte, Germania) | 1000957 | |
| Nunc MaxiSorp fondo piatto | Fisher Scientific GmbH (Hannover, Germania) | 44-2404-21 | |
| Nunc MicroWell 96 pozzetti | Thermo Scientific (Schwerte, Germania) | 260836 | |
| Reagenti | |||
| Agarosio, bassa temperatura di gelificazione | Sigma (München, Germania) | Codice A9414-100G | |
| Miscele e soluzioni saline bilanciate, colture cellulari, terreni e sali classici, sali bilanciati di Earle (EBSS) | Sigma (München, Germania) | E2888-500ML | |
| Penicillina e streptomicina | Lonza (Verviers, Belgio) | 17-602E | |
| Miscela di nutrienti medi F-12 Dulbecco's Modified Eagle's Ham (DMEM F-12) | Gibco (Darmstadt, Germania) | Codice 11039-047 | Terreno di coltura |
| Fosfato di Dulbecco con Ca e Mg (DPBS) | Lonza (Verviers, Belgio) | BE17-513F |
