Un test per valutare la fagocitosi e l'attività di burst ossidativo nei granulociti e nei monociti

Abstract

Fonte: Meaney, M. P. et al., Misurazione della fagocitosi di granulociti e monociti e dell'attività di scoppio ossidativo nel sangue umano. J. Vis. Exp. (2016)

Questo video mostra il test per confermare l'attività fagocitaria da parte delle cellule nel sangue umano tramite citometria a flusso. I granulociti e i monociti confermano la loro attività fagocitaria mostrando una fluorescenza verde e rossa che confermano rispettivamente la presenza di batteri inghiottiti e l'attività ossidativa burst.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono partecipanti umani sono state eseguite in conformità con le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e sono state esaminate dal comitato di revisione istituzionale locale.

1. Preparazione del saggio

1. Raccogliere, preparare e organizzare i materiali specificati per la procedura (fare riferimento alla Tabella dei materiali/attrezzature specifiche).
   1. Etichetta tubi 12 x 75 mm.
      1. Etichettare due provette per ciascun partecipante: una provetta per il test di fagocitosi (etichettare questa provetta con inchiostro nero e una "F....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Tubi 12 x 75 mm, con tappo	VWR	Codice 20170-579	Saranno necessarie 2 provette per campione ("H" e "F") più 3 provette per lotto (per i controlli del saggio; "F", "H" e "Solo sangue").
PBS (10X), pH 7,4	Tecnologie per la vita	Codice: 70011-044
Tappo del flacone Filtro in acetato di cellulosa da 0,2 μm (capacità 500 ml)	Fisher Scientifico	09-741-07
Glucosio in polvere	Tecnologie per la vita	Codice 15023-021
Acido citrico (anidro, testato in coltura cellulare, testato in coltura cellulare vegetale)	Sigma-Aldrich	C2404-100G
Citrato di sodio tribasico diidrato	Sigma-Aldrich	S4641-25G
Diidroetidio (Idroetidina) (HE)	Tecnologie per la vita	D11347
Dimetilsolfossido (DMSO) anidro	Tecnologie per la vita	D12345
Staphylococcus aureus (Ceppo di legno senza proteina A) BioParticelle, coniugato di fluoresceina (FITC)	Tecnologie per la vita	Episodio 2851
Staphylococcus aureus (Ceppo di legno senza proteina A) BioParticelle, non marcate	Tecnologie per la vita	S-2859
Soluzione di blu di tripano, 0,4%	Tecnologie per la vita	Codice 15250-061
4,0 mL di vacutainer contenente 7,2 mg di K2EDTA, essiccato a spruzzo	VWR	BD367861	Avrai bisogno di 1 provetta per la raccolta del sangue K2 EDTA per campione.
Vacutainer da 4,0 mL contenente 68 unità USP di litio eparina, rivestito a spruzzo	VWR	BD367884	Avrai bisogno di 1 provetta per la raccolta del sangue con litio eparina per campione.
COULTER Ac·T 5diff CP	Beckman Coulter	6605705	ad esempio, analizzatore ematologico
COULTER Ac·T 5diff Risciacquo	Beckman Coulter	8547167
COULTER Ac·T 5diff Fix	Beckman Coulter	8547171
COULTER Ac·T 5diff WBC Lyse	Beckman Coulter	8547170
COULTER Ac·T 5diff Hgb Lyse	Beckman Coulter	8547168
COULTER Ac·T 5diff Cal Calibratore	Beckman Coulter	7547175
COULTER Ac·T 5diff Control Plus	Beckman Coulter	7547198
Diluente AcT 5diff	Beckman Coulter	8547169
Puntali per pipette di lunghezza estesa da 200 μl	VWR	37001-526
Vaschetta del ghiaccio isolata	VWR	89198-980	Per bagnomaria con acqua ghiacciata.
Rack per provette in metallo aperto	VWR	Codice 60916-702
Siero fetale bovino	Tecnologie per la vita	Codice 26140-111
Stazione di lavoro TQ-Prep	Beckman Coulter	6605429	ad esempio, stazione di lavoro automatizzata per la preparazione della lisi cellulare
Sistema di reagenti ImmunoPrep	Beckman Coulter	7546999	ad esempio, sistema di reagenti per lisi globuliformi/correzione dei globuli bianchi
COULTER CLENZ	Beckman Coulter	8546929