Un test in vitro basato su cellule dendritiche pulsate con vaccino per indurre la proliferazione dei linfociti

Abstract

Fonte: Liaqat, F., et al., Determinazione dell'immunogenicità del vaccino utilizzando cellule dendritiche derivate da monociti bovini. J. Vis. Exp. (195), (2023).

Questo video mostra un test basato su MoDC su cellule dendritiche derivate da monociti per misurare l'immunogenicità dei vaccini disponibili in commercio. I saggi MoDC studiano le risposte delle cellule dendritiche ad antigeni, agenti patogeni o trattamenti e possono fornire informazioni sulle risposte immunitarie, sullo sviluppo di vaccini e sulla ricerca sull'immunoterapia.

Protocollo

1. Produzione di MoDC ingenui

NOTA: I campioni di sangue intero sono stati ottenuti da un singolo vitello privo di agenti patogeni mediante puntura della vena giugulare con vacutainer eparinizzati (per questo studio sono state utilizzate otto provette di sangue da 9 ml). Trasporta il sangue in una ghiacciaia. Conservare i campioni a 2-4 °C per un uso successivo o elaborarli immediatamente. Mantenere il sangue in rotazione per evitare la coagulazione del sangue. Sterilizzare i vacutainer con etanolo al 70%. Tutti gli esperimenti successivi sono stati eseguiti con un campione biologico e sei repliche tecniche.<....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
ACK Tampone di lisi	Gibco, Thermo Fisher	A1049201	Tampone ammonio-cloruro-potassio per la lisi dei globuli rossi residui nella frazione PBMC raccolta
Kit per la crescita delle cellule dendritiche bovine	Bio-Rad, Regno Unito	PBP015KZZ	Cocktail di citochine composto da IL-4 bovina ricombinante e GMCSF
Kit ELISA per IFN-γ bovino	Bio-Rad	MCA5638KZZ	Kit per la misurazione dell'espressione dell'IFN-γ nel surnatante di coltura
Rabbia Nobivac	MSD Salute degli animali, Regno Unito		1 μL/mL di vaccino inattivato in coltura cellulare contenente> 2 U.I./mL di ceppo virale della rabbia
Guarnizioni ottiche	Bi0-Rad	TCS0803	Provetta PCR piatta da 0,2 mL con 8 tappi, ottica, ultratrasparente, compatibile per macchina qPCR
Soluzione salina tampone fosfato (PBS)	Gibco, Thermo Fisher	10010023	pH 7,4, concentrazione 1x
FlowTubes/ FACS (Fluorescenceactivated single-cell sorting) Tubo	Falcon Corning	352235	Provetta da 5 mL, steriale, in polistirene a fondo tondo con tappo a scatto con filtro cellulare, utilizzabile nell'analisi di citometria a flusso
Microsfere CD14 umane	Miltenyi Bioteck, Germania	Codice 130-050-201	2 mL di microsfere coniugate all'anticorpo monoclonale anti-umano CD14 isotipo IgG2a, utilizzate per la selezione di monociti bovini da PBMC
Anticorpo Ki-67 umano purificato	Biolegend, Stati Uniti	350501	Anticorpo monoclonale, cross-reattivo con la mucca, clone ki-67
RPMI 1640 Medio	Sigma Aldrich	Codice: R8758	Terreni di coltura cellulare con L-glutammina e bicarbonato di sodio
Piastra di prova per coltura tissutale 24	TPP, Svizzera	Codice: 92024	Piastra a 24 pozzetti, sterilizzata mediante radiazioni, trattata con accrescimento, volume 3,18 mL