Articolo metodologico

Misurazione dell'assorbimento microgliale di particelle fluorescenti erogate per via intravitreale mediante citometria a flusso

8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

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Fonte: Murinello, S. et al., Valutazione della funzione fagocitaria microgliale retinica in vivo utilizzando un test basato sulla citometria a flusso. (2016)

Questo video dimostra la citometria a flusso per misurare l'assorbimento microgliale di bioparticelle fluorescenti dopo la somministrazione intravitreale in un occhio di topo. La citometria a flusso rileva le cellule vive che esprimono CD11b e distingue le cellule della microglia fagocitaria che mostrano fluorescenza verde da altre cellule mieloidi, inclusi i monociti che esprimono Ly6C e i neutrofili che esprimono Ly6G.

Protocollo

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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparazione dei materiali per l'iniezione

  1. Sterilizzare un ago e una siringa da 33 G: smontare e sterilizzare in autoclave a 115 οC. Preparare gli aghi per l'iniezione facendo lievitare in soluzione salina sterile tamponata con fosfato (PBS).
  2. Scongelare le particelle marcate in fluorescenza a temperatura ambiente per 5 - 10 minuti. Preparare la soluzione particellare per l'iniezione ricostituendola in una soluzio....

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Risultati

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Figura 1: Impostazione dell'iniezione intravitreale e sezione retinica rappresentativa che mostra le particelle marcate in fluorescenza negli strati retinici. (A)Un impacco di gel viene posizionato sotto il microscopio di dissezione. (B) Un roditore viene tenuto come mostrato per posizionare l'occhio per l'iniezione intravitreale. (e) Tre ore dopo l.......

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Dichiarazioni

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
StereomicroscopioNikonInterrotto
Siringa Hamilton, serie 600sigmaCodice 26702
Calibro 33, mozzo piccolo RN NDL, 0,5 pollici, tipo di punta 4 - 12oHamiltonCodice: 7803-05
Bioparticelle di Zymosan A (S. cerevisiae), coniugato Alexa Fluor 488ThermoFisher ScientificoZ-23373Preparare immediatamente prima dell'iniezione
DPBSCorning21-030-CV
Pinze Dumont #5/45Strumenti per la scienzaCodice 11251-35Ne servono due
Dumont #5SF PinzeStrumenti per la scienzaCodice 11252-00
Forbici a molla Vannas - Tagliente da 3 mmStrumenti per la scienza15000-10curvo
Kit per la Dissociazione del Tessuto Neurale – Neuroni PostnataliMiltenyi BiotecCodice 130-094-802
Provetta a fondo tondo in polistirene da 5 mLFalcone352054
Piastra con fondo a U a 96 pozzettiFalcone353077
Tampone antimacchia (BSA)BD Bioscienze554657
Anticorpo CD11b-BV650BioLeggenda101259
Ly6C-APC-Cy7BioLeggenda128025
Ly6G-PE-Cy7BioLeggenda127617
Ioduro di PropidioBD Bioscienze556463
Anticorpo CD16/32 anti-topo purificatoBioLeggenda101301

Ristampe e permessi

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Tag

Somministrazione intravitrealecellule mieloidi retinicheanticorpi CD11bLy6C Ly6Gioduro di propidiosospensione cellulareblocco del recettore Fc

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