Articolo metodologico

Un test su base molecolare per la quantificazione dei virus dell'influenza A e B

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8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

Fonte: Otto, C. C. et al., Rilevamento molecolare rapido e differenziazione dei virus dell'influenza A e B. J. Vis. Exp. (2017)

Il video mostra un test per quantificare i virus influenzali A e B. Questo test utilizza l'amplificazione dell'endonucleasi con primer specifici per l'influenza e il rilevamento del bersaglio mediante sonde beacon molecolari.

Protocollo

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Prima di eseguire il test

NOTA: Il test dell'influenza A e B è approvato per i campioni di tampone nasofaringeo e per i tamponi nasofaringei conservati in terreni di trasporto virale. I tamponi sono inclusi nel kit e devono essere utilizzati per prestazioni ottimali. Tuttavia, per raccogliere campioni di tamponi nasali è possibile utilizzare anche rayon, schiuma, tamponi floccati o tamponi nasali in poliestere.

  1. Per raccogliere un campione di tampone nasale, inserire il tampone nella narice che ha il drenaggio più visibile o che è più congestionata. Con una rotazione delicata, spingere il tampone nella narice fino a quando non si incontra resistenza e ruotare più volte contro la parete nasale prima di rimuoverlo lentamente dalla narice. Conservare i tamponi e trasportarli in flaconcini contenenti 3 ml di terreno di trasporto virale (VTM).
    NOTA: È necessario prestare particolare attenzione alla raccolta dei campioni appropriata poiché una raccolta inadeguata dei campioni può produrre risultati errati.
    NOTA: I campioni di tampone devono essere testati il prima possibile dopo la raccolta. Tuttavia, possono essere conservati a temperatura ambiente per un massimo di 2 ore o refrigerati a 2-8 °C per un massimo di 24 ore se i test non sono immediatamente disponibili. I campioni appena raccolti sono ideali per prestazioni ottimali del test. La manipolazione, la conservazione e/o il trasporto impropri del campione possono produrre risultati errati.
    NOTA: Come misura precauzionale, le persone che eseguono questo test devono trattare tutti i campioni come potenzialmente infettivi seguendo le precauzioni universali durante la manipolazione dei campioni.
  2. Portare tutti i campioni a temperatura ambiente prima del test.
    NOTA: Tutti i componenti di prova sono per un solo uso e non devono essere utilizzati per eseguire più test. Non mischiare componenti del kit di numeri di lotto diversi. Non utilizzare i reagenti del kit oltre la data di scadenza.
  3. Portare il ricevitore di campioni blu a temperatura ambiente prima del test. La base di prova arancione può essere testata senza la necessità di riscaldarla a temperatura ambiente.
  4. Lasciare tutti i pezzi di prova nell'involucro di alluminio fino a poco prima dell'uso. Accendere lo strumento premendo il pulsante di accensione sul lato dello strumento. Immettere l'ID utente e premere 'OK.

2. Esecuzione del test

  1. Per iniziare il processo di test, toccare "Esegui test" sullo schermo dello strumento. Inserire l'ID del paziente utilizzando la tastiera su schermo o lo scanner di codici a barre e premere "OK". Aprire il coperchio e inserire la base del test Orange nel supporto della base del test Orange.
  2. Verificare che sullo schermo venga visualizzato il test corretto e premere 'OK.' Inserire il ricevitore di campioni blu nel supporto del ricevitore di campioni blu.
    NOTA: Non aprire il ricevitore del campione prima di averlo inserito nello strumento in quanto ciò impedirà al tampone di eluizione di raggiungere la corretta temperatura di esercizio e potrebbe influire sulle prestazioni del test.
  3. Attendere che il ricevitore del campione si riscaldi. Quando richiesto dallo strumento, rimuovere il sigillo di alluminio e posizionare il tampone del paziente da testare nel ricevitore del campione.
    NOTA: Quando si rimuove la lamina, posizionare due dita sul bordo del ricevitore di campioni per assicurarsi che rimanga in posizione.
  4. Mescolare energicamente il tampone nel liquido per 10 secondi, premendo la testa del tampone contro il lato del ricevitore del campione mentre lo si mescola per aiutare a rimuovere il campione dal tampone. Premere 'OK' per procedere. Se i tamponi di prova sono conservati in un mezzo di trasporto virale, agitare il VTM per 10 secondi, quindi aggiungere 200 μl al ricevitore del campione.
  5. Premere la cartuccia di trasferimento bianca nel ricevitore di campioni blu. Continuare a premere sul ricevitore del campione finché l'indicatore arancione non si alza.
  6. Sollevare e quindi collegare la cartuccia di trasferimento alla base di prova. Osservare l'indicatore arancione scendere una volta che il trasferimento della cartuccia è collegato correttamente. Chiudere il coperchio e non aprirlo finché sullo schermo non viene visualizzato il messaggio "Test completato".

3. Controllo di qualità (QC)

  1. Toccare "Esegui test QC" nella schermata iniziale. Selezionare il test QC da eseguire. Confermare il tipo di test in modo che corrisponda al campione QC destinato al test toccando "OK" e seguendo le istruzioni sullo schermo per completare il test.

4. Interpretazione dei risultati

  1. Al termine dell'esecuzione del test, osservare i risultati del test visualizzati sullo schermo con le interpretazioni per la presenza di influenza A, B e sottotipi sconosciuti. In caso di risultati non validi, ripetere il test.

5. Manutenzione e pulizia

  1. Pulire quotidianamente lo strumento e l'area circostante del banco con una soluzione di etanolo al 70% o candeggina al 10%. Spruzzare la soluzione detergente su un panno umido e privo di lanugine per pulire. Non versare le soluzioni direttamente sullo strumento.

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Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Alere i InstrumentAlereNAT-000 (globale), NAT-024 (Stati Uniti)
Kit per il test Alere i Influenza A & B 24Alere425-000 (globale), 425-024 (Stati Uniti)
Alere i Barcode ScannerAlereEQ001001
Stampante universale AlereAlere55115 (Globale), alereiprinter (Stati Uniti)
Pipetta di precisione da 200 μl
Puntali per pipette monouso da 200 μl
Mezzo di trasporto viraleRemelM4-RT

Ristampe e permessi

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