Rilevamento del disassemblaggio del biofilm attraverso un saggio di dispersione

Abstract

Fonte: Nickerson, K. P. et. al., Formazione di biofilm indotta da sali biliari nei patogeni enterici: tecniche per l'identificazione e la quantificazione.J. Vis. Exp.(2018)

Il video mostra un saggio di dispersione di biofilm utilizzando una piastra multi-pozzetto. Il trattamento con tampone e glucosio smonta il biofilm, rilasciando batteri, mentre i sali biliari inducono stress, trattenendo i batteri nella sostanza polimerica extracellulare protettiva. Una maggiore dispersione con tampone e glucosio conferma il successo del disassemblaggio del biofilm, stimato dalla misurazione delle unità formanti colonie.

Protocollo

1. Preparazione dei reagenti

1. Terreno dei sali biliari: per preparare il brodo di soia triptico (TSB) contenente lo 0,4% di sali biliari (peso/volume), risospendere 200 mg di sali biliari in 50 ml di TSB autoclavato. Sterilizzare con filtro da 0,22 μm. Prepara un fresco medio settimanale.
   Note: I sali biliari abitualmente utilizzati sono una miscela 1:1 di colato di sodio e desossicolato di sodio isolati dalla cistifellea ovina e bovina. Come dimostrato in precedenza, la presenza di glucosio era necessaria per la formazione del biofilm indotta dal sale biliare. TSB ha aggiunto glucosio rispetto al brodo Luria-Bertani....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Brodo di soia trittico	Sigma-Aldrich	22092-500G
glucosio	sigma	G7021-1KG
Sali biliari	sigma	B8756-100G
LB Agar	sigma	L7533-1KG
Provette per coltura da 14 mL, 17 x 100 mm, plastica, sterili	pescatore	14-959-11B
Piastre a fondo piatto a 96 pozzetti (trasparenti)	TPP	Codice 92696
Lettore di piastre a 96 pozzetti	Spettromax
Lettore di piastre fluorescenti	Sinergia Biotek 2
Incubatore a scuotimento 37°C	Nuovo Brunswick Scientifico Excella E25
Incubatore a piastre 37°C	Thermolyne Serie 5000