Rilevazione quantitativa multiplexata di batteri mediante microsfere magnetiche marcate con colorante

Abstract

Questo video mostra la rilevazione quantitativa multiplex di batteri utilizzando microsfere di polistirene magnetico carbossilato colorate in set distinti. La procedura comprende la formazione di complessi perline-batteri, la separazione magnetica e l'analisi basata sul flusso, consentendo una quantificazione precisa e simultanea di più batteri nello stesso pozzetto di reazione.

Protocol

1. Accoppiamento covalente di anticorpi di cattura con microsfere MagPlex

Ogni anticorpo di cattura viene coniugato a uno specifico set di microsfere magnetiche carbossilate utilizzando una procedura in due fasi come descritto di seguito.

NOTA: È disponibile anche un kit di accoppiamento che include tutti i reagenti, i tamponi e i materiali necessari per l'accoppiamento delle microsfere (vedi TABELLA DEI MATERIALI).

1. Risospendere la sospensione di microsfere disaccoppiate di serie secondo le istruzioni descritte nella scheda informativa del prodotto f....

Results

Figura 1: Flusso di lavoro del saggio immunologico a sandwich di cattura multiplexata. Una miscela multiplex di microsfere accoppiate ad anticorpi viene dispensata in ciascun pozzetto e il campione viene aggiunto. Dopo l'incubazione per 1 ora, le reazioni vengono lavate e vengono aggiunti gli anticorpi di rilevamento biotinilati. Dopo un'incubazione di 1 ora, le reazioni vengono nuov.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microsfere MagPlex®	Luminex®	MC100xx-YY	Consultare il sito Web per i singoli numeri di catalogo (https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#order)
Provette per microcentrifuga da 1,5 mL	Eppendorf™	22431081	Proteina LoBind®
0,1 M di fosfato di sodio monobasico (NaH2PO4), pH 6,2	MilliporeSigma	Episodio 3139	Buffer di attivazione
cloridrato di 1-etil-3-[3-dimetilamminopropil]carbodiimmide (EDC)	Termo Scientifico™	Pierce™ 77149
N-idrossisulfosuccinimide (Sulfo-NHS)	Termo Scientifico ™	Pierce™ 24510
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), pH 7,4	MilliporeSigma	P3813	Buffer di accoppiamento
Kit di accoppiamento anticorpo xMAP®	Luminex®	40-50016	Kit opzionale disponibile per l'accoppiamento a microsfere.
Anticorpo anti-Escherichia coli O157:H7	SeraCare	Codice: 5310-0326	Policlonale, utilizzato sia per l'acquisizione che per il rilevamento
Anticorpo anti-Salmonella CSA-Plus	SeraCare	Codice: 5310-0321	Policlonale, utilizzato sia per l'acquisizione che per il rilevamento
Anticorpo anti-Campylobacter spp.	SeraCare	Codice: 5310-0324	Policlonale, utilizzato sia per l'acquisizione che per il rilevamento
Anticorpo anti-Listeria	SeraCare	Codice: 5310-0319	Policlonale, genere-specifico, utilizzato sia per la cattura che per il rilevamento
PBS, pH 7,4 contenente 0,02% Tween-20, 0,1% BSA, 0,05% sodio azide (PBS-TBN)	MilliporeSigma	P3563 A7888 S8032	Può essere utilizzato fino all'1% di BSA
Anticorpo anti-Escherichia coli O157:H7	SeraCare	Codice: 5310-0326	Policlonale
(EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotina) (Pierce).	Termo Scientifico™	Codice A39257
E. coli O157:H7	SeraCare	Codice: 5370-0013	Ucciso a caldo
Salmonella sierotipo Typhimurium	SeraCare	Codice: 5370-0002	Ucciso a caldo
Campylobacter jejuni	SeraCare	Codice: 5370-0011	Ucciso a caldo
Listeria monocytogenes	SeraCare	5370-0010	Ucciso a caldo
Streptavidina, R-ficoeritrina coniugato (SAPE)	Termo Scientifico™	S866