È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.

Articolo metodologico

Una tecnica ex vivo per produrre cellule T del recettore dell'antigene chimerico

1.3K visualizzazioni

⸱

8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

Fonte: Ghassemi, S., et al. Produzione di cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) per l'immunoterapia adottiva. (2019)

Questo video mostra una tecnica per produrre cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) ex vivo. Le cellule T umane sono incubate con biglie magnetiche rivestite con anticorpi anti-CD3 e anti-CD28, insieme a un terreno integrato con interleuchina-2 (IL-2), che porta all'attivazione e alla proliferazione delle cellule T. Vengono introdotti vettori lentivirali transgenici, che consentono all'RNA transgenico di integrarsi nel genoma ospite ed esprimere il transgene. Ciò si traduce in cellule T trasdotte che esprimono recettori chimerici dell'antigene (CAR) sulla loro superficie. Le cellule T vengono raccolte in momenti definiti per valutare l'espressione e la crioconservazione delle CAR.

Protocollo

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Attivazione, Trasduzione ed Espansione delle Cellule T

  1. Attivare le cellule T umane primarie fresche o crioconservate mescolandole con perle magnetiche anti-CD3/CD28 (ad es. dynabeads) in un rapporto di 3 perle per cellula T in piastre di coltura cellulare a 6 pozzetti. Colture di cellule T in terreno X-VIVO 15 integrate con il 5% di siero AB umano normale, 2 mM di L-glutammina, 20 mM di acido 4-(2-idrossietil)-1-piperazineetanosolfonico (HEPES) e interleuchina 2 (IL2, 100 unità/mL)....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Anti dynabeads CD3/CD28Thermo Fisher40203D
APC Topo Anti-Umano CD8BD Bioscienze555369RRID:AB_398595
APC-H7 Anticorpo CD8 umano di topoBD Bioscienze560179RRID:AB_1645481
CountBright Perline di conteggio assoluto,InvitrogenCodice: C36950
HEPESGibcoCodice 15630-080
Siero AB umanoValle BiomedicaHP1022
IL-2 Umano IS, grado premiumMiltenyiCodice 130-097-744
L-glutamminaGibcoCodice 28030-081
Contatore coltro multisizerBeckman Coulter
X-VIVO 15Gibco04-418Q

Esplora altri articoli

Trasduzione con vettore lentiviraleAttivazione delle cellule TAnalisi tramite citometria a flussoSeparazione tramite microsfere magneticheTecnica di crioconservazioneValutazione dell'espressione di CARSupplementazione con interleuchina-2Microsfere anti-CD3/CD28Integrazione di RNA transgenico