Immunoterapia

Questo video illustra un metodo per isolare le cellule T natural killer invarianti, note anche come cellule iNKT. La procedura inizia con l'iniezione di un glicolipide sintetico in un topo per stimolare l'attivazione e la proliferazione delle cellule iNKT nella milza. Successivamente, le sospensioni di singole cellule vengono preparate dalla milza e incubate con complessi di riconoscimento delle cellule iNKT marcati con fluorofori, seguite da una separazione basata su biglie magnetiche, per...

Questo video mostra una tecnica per produrre cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) ex vivo. Le cellule T umane sono incubate con biglie magnetiche rivestite con anticorpi anti-CD3 e anti-CD28, insieme a un terreno integrato con interleuchina-2 (IL-2), che porta all'attivazione e alla proliferazione delle cellule T. Vengono introdotti vettori lentivirali transgenici, che consentono all'RNA transgenico di integrarsi nel genoma ospite ed esprimere il transgene. Ciò si traduce in...

Questo video mostra un test per la trasduzione virale mediata da polimeri cationici in cellule natural killer (NK). Le cellule sono incubate con vettori di lentivirus transgenici che codificano per una proteina fluorescente. L'aggiunta di un polimero cationico consente al virus di attaccarsi alle cellule e integrare il suo RNA nel genoma ospite, esprimendo la proteina fluorescente. La fluorescenza viene quantificata per valutare l'aumento della trasduzione indotto dal polimero.

Questo video mostra il processo di trasfezione dei macrofagi primari con mRNA modificato che codifica per la proteina fluorescente verde. Questi mRNA modificati, progettati per ridurre l'immunogenicità e migliorarne la stabilità, garantiscono la trasfezione di successo e la successiva espressione di proteine fluorescenti verdi, confermata dalla microscopia a fluorescenza.

Questo video mostra una tecnica per rimuovere selettivamente cellule specifiche da una coltura cellulare 3D mista attraverso la fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso. In questo metodo, le cellule bersaglio vengono identificate con precisione utilizzando un anticorpo coniugato con un fotoassorbitore NIR. La successiva irradiazione con luce infrarossa induce la morte cellulare, eliminando efficacemente le cellule bersaglio dalla coltura 3D.

Questo video mostra una tecnica basata su piccoli RNA interferenti (siRNA) per interferire con il flusso autofagico. Un siRNA che ha come bersaglio l'mRNA di FIP200 viene introdotto in cellule dendritiche immature (iDC) derivate da monociti utilizzando l'elettroporazione, causando il knockdown dell'espressione di FIP200 e portando all'inibizione della distruzione della lamina nucleare attraverso l'autofagia. Dopo l'aggiunta del virus dell'herpes simplex (HSV), l'uscita nucleare della progenie...

Il video mostra un test che utilizza cellule T CD8+ derivate da cellule staminali pluripotenti indotte umane (iPSC) per inibire la replicazione del virus dell'epatite B (HBV) nei topi. Queste cellule T, ingegnerizzate con recettori HBV-specifici, vengono trasferite in topi transgenici. I plasmidi del genoma dell'HBV competenti per la replicazione vengono quindi iniettati direttamente nel fegato, consentendo l'assorbimento del DNA virale. Una volta che gli antigeni virali sono espressi e...

Questo video dimostra una tecnica per la generazione ex vivo di cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR) antigene specifico del tumore. I vettori retrovirali che trasportano RNA transgenico vengono mescolati con le cellule della milza in un terreno integrato con interleuchina-2 per promuovere la sopravvivenza e la proliferazione delle cellule T. La miscela viene quindi trasferita su una piastra rivestita con frammenti di fibronectina umana ricombinante e centrifugata per facilitare...

Il video delinea un processo per la creazione di cellule CAR T geneticamente modificate attraverso il sistema CRISPR-Cas9. L'infezione delle cellule T con lentivirus CRISPR e CAR provoca modifiche al gene bersaglio e la sintesi di un recettore chimerico dell'antigene o CAR, portando infine alla formazione di cellule T CAR geneticamente modificate.

Questo video mostra un test per l'esecuzione dell'editing genetico in cellule T umane utilizzando la tecnologia CRISPR-Cas9. Una miscela di cellule T primarie CD4+ e CD8+ è combinata con un complesso ribonucleoproteico CRISPR-Cas9, mirato a geni specifici per il knockout. Dopo l'elettroporazione, l'sgRNA guida Cas9 verso la sequenza di DNA bersaglio, creando tagli precisi. Questi tagli vengono poi riparati dal meccanismo di giunzione non omologa della cellula, portando al knockout genico.

Questo video dimostra una tecnica per la modificazione genetica mediata da ribonucleoproteine Cas9 di cellule natural killer primarie (NK). Una ribonucleoproteina Cas9, costituita da un'endonucleasi Cas9 legata a un RNA guida (gRNA) formata dall'accoppiamento di basi di un RNA CRISPR (crRNA) e di un crRNA transattivante (tracrRNA), viene introdotta nelle cellule natural killer primarie tramite elettroporazione. La ribonucleoproteina prende di mira e scinde il DNA ospite nel sito bersaglio,...

Questo video mostra un test in vitro che valuta gli effetti citotossici delle cellule T CAR su sferoidi tumorali 3D che esprimono proteine fluorescenti. Questa valutazione utilizza la sonda fluorescente rossa Annexin V, che si lega ai residui di fosfatidilserina esposti sul lembo esterno delle cellule tumorali apoptotiche dopo interazioni con le cellule T CAR. La fluorescenza rossa emessa dalla sonda aiuta a distinguere queste cellule da quelle sane che emettono fluorescenza verde.

Questo video mostra un metodo per stabilire una co-coltura tridimensionale di sferoidi tumorali e cellule T. Viene preparato un calco di agarosio con micropozzetti contenenti sferoidi tumorali, seguito dall'aggiunta di cellule T. Dopo l'incubazione, questa configurazione consente di studiare l'interazione delle cellule T con gli sferoidi tumorali in un ambiente tridimensionale controllato.

Questo video mostra un test in vitro per convalidare l'attività delle cellule T del recettore dell'antigene chimerico (CAR). Le cellule di linfoma a cellule B che esprimono l'antigene CD19 e la luciferasi citoplasmatica sono co-coltivate con cellule CAR T specifiche per CD19. Il legame del CAR al CD19 su un tumore induce le cellule CAR T a rilasciare citochine e tossine che causano citotossicità delle cellule tumorali. L'attività delle cellule CAR T viene valutata quantificando la citochina...

Questo video mostra l'esecuzione di un test di rilascio di lattato deidrogenasi per determinare la citotossicità delle cellule natural killer (NK) contro le cellule tumorali bersaglio. Il test quantifica il rilascio dell'enzima lattato deidrogenasi citoplasmatico dalle cellule tumorali misurando l'assorbanza del prodotto di colore rosso formato.

Questo video dimostra una tecnica per generare cellule T del recettore chimerico dell'antigene (CAR) antigene-specifico attraverso la trasduzione retrovirale. Le cellule T CD8+ murine attivate vengono aggiunte a una piastra a micropozzetti rivestita con frammenti di fibronectina ricombinante. Vengono quindi introdotti vettori retrovirali contenenti RNA transgenico che codifica per un recettore chimerico dell'antigene (CAR) antigene-specifico e la piastra viene centrifugata per facilitare la...

Questo video mostra un metodo per generare vescicole di membrana plasmatica da cellule staminali del midollo osseo facendole passare rapidamente attraverso un filtro a membrana. Questi PMV mostrano un potenziale per la terapia sostitutiva del citoplasma.

Questo video dimostra un test per generare neutrofili associati al tumore (TAN) anti-angiogenici. Dopo l'assunzione di un tumore di melanoma murino contenente TAN pro-angiogenici, le singole cellule vengono isolate utilizzando la selezione cellulare attivata dalla fluorescenza (FACS) e trattate con un inibitore della nicotinammide fosforibosiltransferasi (NAMPT) per ridurre la capacità di stimolare l'angiogenesi.

Questo video mostra un test in vitro che utilizza β-glucani per attivare le cellule microgliali per la produzione di radicali superossido, una specie reattiva dell'ossigeno. Nelle cellule tumorali cerebrali, gli ossidanti reattivi generati sopprimono attivamente la proliferazione delle cellule tumorali e inducono la morte cellulare.

Questo video mostra una procedura per il trasferimento adottivo di cellule dendritiche presentanti l'antigene (DC) trattate con sale nei topi. Le cellule dendritiche (DC) CD11c+ murine sono esposte a un terreno contenente elevate quantità di sodio, formando addotti proteici isolevuglandina (IsoLG) nelle cellule. Questi addotti fungono da neoantigeni e si presentano sulla superficie delle DC. Le cellule trattate ad alto contenuto di sale vengono iniettate nei topi attraverso il trasferimento di...

Questo video mostra un test per generare cellule T CD8αβ+ derivate da cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) derivate da cellule T CD8αβ+ specifiche per l'antigene tumorale. Le iPSC antigene-specifiche del tumore vengono coltivate su un monostrato di cellule stromali e differenziate in cellule progenitrici ematopoietiche (HPC). Le HPC sono differenziate in cellule T CD4+ CD8+ doppiamente positive utilizzando un mezzo di differenziazione. Queste cellule vengono quindi stimolate a generare...

Questo video dimostra una tecnica di fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso per trattare il cancro del polmone in un modello murino ingegnerizzato che mostra cellule tumorali che esprimono luciferasi. Dopo aver iniettato un coniugato anticorpo-fotosensibilizzante (APC) che si lega ad antigeni specifici sulle cellule tumorali, il topo viene esposto a radiazioni nel vicino infrarosso, inducendo cambiamenti fotochimici nell'APC e portando alla morte necrotica delle cellule tumorali legate.

Questo video dimostra una tecnica per generare topi del sistema immunitario umano (HIS). Le cellule staminali ematopoietiche (HSC) CD34+ sono isolate dalle cellule del buffy coat del sangue del cordone ombelicale umano utilizzando perle magnetiche rivestite di anticorpi. Le HSC CD34+ vengono espanse in un terreno di crescita arricchito con citochine e crioconservate. Infine, le HSC scongelate vengono iniettate in un cucciolo di topo immunodeficiente per stabilire il modello murino HIS.

Questo video illustra i test di terapia adiuvante o aggiuntiva in un modello murino con tumori sottocutanei resecati in modo incompleto. Il topo parzialmente resecato con tumore è trattato con un anticorpo che ha come bersaglio la proteina anti-citotossica delle cellule T regolatorie, riducendo potenzialmente la ricrescita tumorale e suggerendo un'efficace terapia adiuvante.

Questo video mostra un test per valutare l'efficacia della terapia antiretrovirale combinata orale (cART orale) in un modello murino umanizzato infetto da virus dell'immunodeficienza umana-1 (HIV-1). Una combinazione di farmaci che hanno come bersaglio l'HIV-1, tra cui gli inibitori nucleosidici della trascrittasi inversa e gli inibitori del trasferimento del filamento dell'integrasi, viene somministrata insieme a un integratore alimentare e antibiotici. A seguito del consumo di questa miscela...

Questo video mostra un metodo per innestare pelle umana su un topo immunodeficiente con una risposta neutrofila soppressa. Il metodo prevede l'applicazione di pelle umana a spessore diviso sul letto di innesto del topo, sigillandolo e coprendolo per il recupero. Alla fine, la pelle umana aderisce alla pelle del topo, stabilendo la vascolarizzazione e la circolazione, con conseguente xenotrapianto cutaneo di successo.

Questo video mostra un test per generare un modello murino di xenotrapianto umanizzato. A un topo immunocompromesso viene iniettata ciclofosfamide per causare la deplezione delle cellule immunitarie. Le cellule tumorali derivate dal paziente mescolate con cellule mononucleate del sangue periferico umano (PBMC) in un idrogel vengono iniettate per via sottocutanea nel topo, formando un tumore con cellule T infiltranti.

Questo video presenta una procedura per l'impianto di cannula intracranica in un modello murino di tumore cerebrale, per facilitare la somministrazione di un agente immunoterapeutico. La somministrazione di cellule T del recettore dell'antigene chimerico specifico per glipicano-2 nel microambiente tumorale innesca l'attivazione delle cellule T, con conseguente lisi tumorale e regressione del tumore.

Il video dimostra la somministrazione locoregionale di virus oncolitici attraverso l'iniezione arteriosa epatica come approccio terapeutico per il carcinoma epatocellulare. Questi virus si replicano selettivamente nelle cellule tumorali, inducendo la lisi cellulare e rilasciando antigeni associati alle cellule tumorali. Questo processo innesca la morte cellulare immunogenica, inducendo una risposta antitumorale.

Questo video dimostra una tecnica per valutare l'attività antitumorale della proteina attivante i neutrofili Helicobacter pylori, o HP-NAP, in un modello di cancro alla vescica di topo. HP-NAP interagisce con i neutrofili delle cellule tumorali per produrre citochine pro-infiammatorie, inducendo la differenziazione delle cellule T naive in fenotipi di cellule T helper di tipo 1 (Th1) e citotossiche di tipo 1 (Tc1). Le cellule Th1 e Tc1 secernono interferone-gamma, inibendo l'angiogenesi...

Questo video mostra una terapia cellulare per l'artrite autoimmune nei topi. Le cellule T regolatorie derivate da iPSC che esprimono recettori specifici per l'ovoalbumina vengono iniettate con albumina sierica bovina metilata (mBSA) emulsionata in un adiuvante. Le cellule presentanti l'antigene (APC) murino elaborano e presentano l'mBSA alle cellule T, provocando l'attivazione e la migrazione delle cellule T verso la membrana sinoviale dell'articolazione del ginocchio. Le iniezioni successive...

Questo video dimostra una tecnica di iniezione stereotassica per la somministrazione di linfociti T effettori umani in un modello murino portatore di un tumore cerebrale umano. Dopo aver posizionato un topo anestetizzato portatore di tumore su un telaio stereotassico e aver creato un foro di bava nella posizione di iniezione sul cranio, i linfociti T effettori vengono iniettati nel sito del tumore.

Questo video dimostra il metodo per generare un topo BLT (midollo, fegato e timo) osseo umanizzato doppio con un sistema immunitario umano funzionale e un microbioma intestinale stabile simile a quello umano innestato.

Questo video dimostra la generazione di aerosol di farmaci e la somministrazione mirata di questi aerosol solo per il naso ai topi utilizzando un'unità di inalazione dotata di un generatore di aerosol. Il topo è trattenuto in un sistema di ritenuta solo per il naso e collegato all'unità di inalazione, che eroga il farmaco direttamente nella cavità nasale del topo. Successivamente, il farmaco passa attraverso la trachea ed entra nei polmoni.

Questo video mostra un metodo per generare un modello di interposizione aortica su un topo per studiare il rigetto vascolare indotto da alloimmuni. Dopo aver posizionato un topo donatore anestetizzato in posizione supina, l'aorta addominale infrarenale (IAA) viene accuratamente isolata dalle strutture circostanti. I vasi ramificati sono legati ed entrambe le estremità dell'IAA sono bloccate per impedire il flusso sanguigno prima della resezione. Successivamente, l'IAA del donatore viene...

Il video dimostra un metodo chirurgico per generare un modello murino di trapianto di milza eterotopica vascolarizzata. La cavità addominale di un topo donatore anestetizzato viene aperta chirurgicamente per rimuovere la milza. Vengono identificate la vena cava inferiore e l'aorta infrarenale, i loro rami lombari vengono legati e vengono praticate aperture per il trapianto eterotopico di una milza da un topo donatore congenico. Dopo aver completato l'anastomosi vascolare e ripristinato il...

Il video dimostra un metodo per generare un modello di ratto con demielinizzazione corticale cerebrale diffusa. Ciò comporta l'interruzione della barriera emato-encefalica iniettando citochine pro-infiammatorie nei topi innescati con la proteina della guaina mielinica ricombinante. Questo processo facilita l'infiltrazione delle cellule immunitarie, con conseguente diffusa demielinizzazione corticale cerebrale.

Il video dimostra la generazione di un modello di pelle ovina ex vivo infettato da Staphylococcus aureus. Ciò comporta il trattamento della sezione bioptica cutanea della fronte di un agnello con antibiotici, la creazione di un letto della ferita, il posizionamento su una membrana permeabile in una piastra multipozzetto con terreno privo di antibiotici e l'instaurazione di un'infezione batterica nella ferita cutanea.

Il video dimostra un metodo per trasferire direttamente il DNA plasmidico codificante l'interleuchina-15 nel tessuto cutaneo di un modello murino carente di interleuchina-15 attraverso l'agopuntura utilizzando microaghi. Questi microaghi generano micropunture nello strato più esterno della pelle, facilitando l'assorbimento e la trasfezione del DNA plasmidico nelle cellule epidermiche, compresi i cheratinociti, all'interno del tessuto cutaneo.

Questo video mostra una procedura di trapianto di microbiota fecale in un topo carente di interleuchina-10 con infiammazione del colon. I microbi fecali colonizzati nell'intestino rilasciano metaboliti secondari, provocando il rilascio di citochine antinfiammatorie e riducendo l'infiammazione del colon.

Questo video dimostra un metodo per generare un modello murino umanizzato duale con un sistema immunitario umano e cellule epatiche. Comporta il trapianto di cellule epatiche umane e cellule staminali e progenitrici ematopoietiche in un topo immunodeficiente transgenico tramite iniezione intrasplenica, portando all'attecchimento delle cellule epatiche e allo sviluppo di cellule immunitarie umane.

Il video dimostra la tecnica di terapia fagica mirata all'infezione da Pseudomonas aeruginosa negli embrioni di zebrafish con fibrosi cistica. La terapia fagica riduce efficacemente la carica batterica e mitiga le risposte immunitarie proinfiammatorie negli embrioni di pesce zebra FC infettati da batteri, portando a una riduzione della letalità degli embrioni FC.

Questo video mostra una tecnica per iniettare plasma ricco di piastrine (PRP) nel tendine d'Achille sezionato dei ratti. Un piccolo segmento viene asportato dal tendine d'Achille di un ratto ricevente, il sito viene suturato e il ratto può riprendersi. Contemporaneamente, il sangue intero viene raccolto da un ratto donatore e centrifugato per ottenere PRP, che viene quindi attivato e iniettato nel sito suturato del ratto ricevente per indurre la riparazione del tendine.

Il video dimostra una tecnica per generare un modello murino umanizzato con immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro il virus dell'immunodeficienza umana (HIV). Il tessuto del timo fetale umano e le cellule staminali ematopoietiche (HSC) ingegnerizzate vengono impiantate nella capsula renale di un topo gravemente immunocompromesso. Le HSC, che esprimono i recettori chimerici dell'antigene (CAR) contro l'HIV, sono mescolate in una miscela proteica gelatinosa che ne promuove la...

Questo video mostra la somministrazione orale di cellule di lievito trasformate in un modello murino. Le cellule di lievito trasformate vengono somministrate per via orale utilizzando una tecnica di gavage, raggiungendo lo stomaco del topo. Successivamente, le cellule migrano verso l'intestino tenue, dove le cellule microfold le inghiottono e facilitano il loro trasferimento ai cerotti di Peyer e ottengono l'accesso al sistema immunitario intestinale.

Questo video mostra la canalostomia, una procedura che consente la somministrazione locale di farmaci nell'orecchio interno di un topo attraverso il canale semicircolare con danni minimi all'udito e alla funzione vestibolare. Questo metodo consente l'inoculazione di vettori virali, prodotti farmaceutici e piccole molecole nell'orecchio interno del topo.

Questo video dimostra un metodo basato sull'imaging per visualizzare le cellule beta trapiantate che esprimono luciferasi in un topo diabetico immunodeficiente non obeso. L'introduzione di splenociti da un topo diabetico porta alla progressiva distruzione delle cellule beta, confermata visivamente dal calo della luminescenza dopo l'introduzione del substrato.

Questo video mostra un test di vaccinazione contro i tumori basato su cellule. Un topo, iniettato per via intradermica con cellule di melanoma B16-F10 per la formazione del tumore, viene vaccinato con cellule B16-F10 che secernono citochina Flt3L vicino al tumore sviluppato. Il Flt3L secreto dal vaccino promuove la maturazione e la proliferazione delle cellule dendritiche che poi presentano antigeni tumorali alle cellule T nei linfonodi, innescando una risposta immunitaria antitumorale mirata.

Questo video mostra un metodo per generare vaccini multivalenti con vescicole di membrana esterna (OMV). Le cellule di mammifero vengono trasfettate per esprimere e secernere antigeni virali fusi a uno SpyTag e a un tag di poliistidina. Questi antigeni vengono quindi purificati utilizzando una colonna di affinità per acido nichel-nitrilotriacetico (Ni-NTA). L'antigene purificato viene miscelato con vescicole della membrana esterna che esprimono la proteina SpyCatcher (SC) legata alla superficie.

Questo video dimostra la produzione di vaccini tumorali in nanoemulsione. I depositi stabili del serbatoio dell'olio che trasportano peptidi sintetici e adiuvanti sono prodotti mediante nanoemulsione a bassa energia, offrendo una promessa significativa per l'immunoterapia tumorale.

Questo video dimostra l'immunizzazione BCG intranasale nei topi, attivando risposte immunitarie sia innate che adattative, portando allo sviluppo di cellule T di memoria residenti nei polmoni e cellule B effettrici, migliorando così la protezione contro le infezioni da Mycobacterium.

Il video mostra un metodo per creare virus influenzali ricombinanti adattati al freddo. Comporta la trasfezione di cellule umane con plasmidi bidirezionali, seguita dall'incubazione a temperatura più bassa per produrre virus adatti alla produzione di vaccini, caratterizzati da una ridotta replicazione in condizioni più calde.

Questo video dimostra un metodo per la generazione di una nuova piattaforma basata su bolle polimeriche o polibolle che consente il rilascio ritardato a raffica. I polimeri a base di poliestere vengono utilizzati per formare le polibolle con struttura core-shell e piccole molecole e antigeni possono essere utilizzati come carico.

Questo video mostra un test in vitro per studiare gli effetti antitumorali del surnatante libero da cellule di Lactobacillus (LCFS). Dopo aver esposto gli sferoidi del cancro del colon-retto a dosi variabili di LCFS, l'interazione con i metaboliti batterici in LCFS induce l'apoptosi nelle cellule tumorali, interrompendo la struttura sferoidale e portando alla morte cellulare in modo dose-dipendente.

Questo video mostra un metodo per generare un candidato vaccino a mRNA utilizzando nanoparticelle polimeriche. Il polimero cationico interagisce con l'mRNA caricato negativamente, formando poliplessi. La formazione di poliplessi stabilizza l'mRNA, rendendolo un potenziale candidato per futuri vaccini a mRNA in applicazioni immunoterapeutiche.

Questo video mostra la purificazione di nanoparticelle proteiche autoassemblate marcate con istidina o SAPN utilizzando la cromatografia liquida di affinità. Le frazioni di SAPN purificate risultanti sono adatte per lo sviluppo di vaccini e sono promettenti per potenziali applicazioni immunoterapeutiche.

Il video mostra una tecnica di iniezione guidata da ultrasuoni per la somministrazione di farmaci terapeutici nelle ghiandole salivari di un paziente umano.

Il video mostra una tecnica per caricare antigeni su Mycobacterium bovis BCG per migliorare le sue proprietà immunogeniche. Il metodo utilizza il sistema avidina-biotina per rivestire la superficie batterica con antigeni esogeni.

Il video mostra un test in vitro per lo screening degli interferoni con attività antivirale contro il virus Zika, un patogeno umano. All'interno della cellula ospite, il virus Zika subisce la moltiplicazione dopo l'internalizzazione, infettando le cellule vicine e creando zone distinte o placche virali. L'interferone di tipo I, agendo come agente antivirale, ostacola la moltiplicazione del virus, prevenendo così la formazione di placche virali nel monostrato della cellula ospite.

Questo video mostra un test per l'immunizzazione di un modello murino con sporozoiti vivi attenuati. Gli sporozoiti di Plasmodium attenuati dalle radiazioni vengono iniettati nel lato dorsale dell'orecchio del topo. Dopo le iniezioni in più punti su entrambe le orecchie, il topo può riprendersi.