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Articolo metodologico

Generazione di virus influenzali vivi attenuati ricombinanti per vaccini

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8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

Fonte: Pérez-Girón, J. V. et al, Somministrazione intranasale di vaccini antinfluenzali ricombinanti in modelli murini chimerici per studiare l'immunità della mucosa.J. Vis. Exp. (2015)

Il video mostra un metodo per creare virus influenzali ricombinanti adattati al freddo. Comporta la trasfezione di cellule umane con plasmidi bidirezionali, seguita dall'incubazione a temperatura più bassa per produrre virus adatti alla produzione di vaccini, caratterizzati da una ridotta replicazione in condizioni più calde.

Protocollo

1. Generazione di vaccini influenzali vivi attenuati ricombinanti mediante genetica inversa

NOTA: Il protocollo dettagliato per la generazione di virus influenzali ricombinanti mediante genetica inversa è stato descritto da studi precedenti e non rientra nell'ambito di questo rapporto. In breve, il salvataggio dei vaccini antinfluenzali adattati al freddo (CAV) viene effettuato in una cabina di biosicurezza di classe II in contenimento di livello di biosicurezza 2 (BSL2) e prevede le fasi descritte di seguito.

  1. Generare un vaccino antinfluenzale riassortante adattato al freddo utilizzando come sf....

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Risultati

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Figura 1. Ingegnerizzazione di LAIV tracciabili.(A) I segmenti dell'influenza clonati in plasmidi ambisense sono stati trasfettati in cellule 293T utilizzando Lipofectamine 2000. 24 ore dopo la trasfezione, i surnatanti ottenuti dalle cellule 293T sono stati utilizzati per rivestire le cellule renali canine Madin-Darby (MDCK) permissive per l'influenza in presenza dell'1% di tripsina.......

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Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Eagle Medium modificato di Dulbecco (DMEM 1X)Tecnologie Gibco RL-LifeCodice 41965-039
Opti MEMTecnologie Gibco RL-LifeCodice 31985-047
Lipofectamina 2000Tecnologie Invitrogen-LifeCodice 11668-027
Penicillina-Streptomicina (10.000 U/ml)PAApagg. 11-010
Albumina sierica bovinaSigma-AldrichCodice A2153
Dimetil solfossido (DMSO)Sigma-AldrichD2650
Tripsina-TPCKSigma-AldrichT1426

Tag

Virus dell influenza ricombinantevaccino vivo attenuatotrasfezione plasmidica bidirezionaleproduzione di virus adattati al freddocoltura di cellule epiteliali umaneoverlay di cellule MDCKincubazione a temperatura inferioreauto assemblaggio delle proteine viraliprotocollo di preparazione del vaccinosovraespressione dell acido sialico