Purificazione di nanoparticelle proteiche autoassemblanti mediante cromatografia di affinità

Abstract

Fonte: Karch, C. P. et al., Produzione di nanoparticelle proteiche autoassemblanti espresse da E. coli per vaccini che richiedono la presentazione di epitopi trimerici.J. Vis. Exp. (2019)

Questo video mostra la purificazione di nanoparticelle proteiche autoassemblate marcate con istidina o SAPN utilizzando la cromatografia liquida di affinità. Le frazioni di SAPN purificate risultanti sono adatte per lo sviluppo di vaccini e sono promettenti per potenziali applicazioni immunoterapeutiche.

Protocol

1. Espressione del nucleo di nanoparticelle proteiche autoassemblanti contenente un fascio a sei eliche (SHB-SAPN) Proteina in E. coli BL21(DE3)

1. Miscelare 95 mL del componente A e 5 mL del componente B del terreno in un pallone di vetro sterile da 2 L Erlenmeyer secondo le istruzioni del produttore (vedere la Tabella dei materiali). Aggiungere ampicillina a una concentrazione finale di 100 μg/mL.
2. Inoculare il terreno con E. coli da una coltura stock di glicerolo precedentemente stabilita. Incubare la coltura a 30 °C con agitazione a 200 rotazioni al minuto (rpm) per 48 h.
   NOTA:

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-propanolo	pescatore	BP26181	4 L
ampicillina	pescatore	BP1760-25	25 g
Corning Filtro sottovuoto monouso / Sistemi di stoccaggio	pescatore	09-761-108	Una varietà di dimensioni
Colonne preimpaccate GE Healthcare HisTrap HP da 5 mL	GE HealthCare	45-000-325	Confezione da 5
glicerolo	pescatore	BP229-4	4 L
Imidazolo	pescatore	O3196-500	500 g
Magic Media E. coli Expression Medium	ThermoFisher	K6803	1 litro
MilliporeSiringa sterile Sigma Millex Filtri da 0,22 mm	Millipore	SLGV033RB	Confezione da 250
One Shot BL21 Star (DE3) E. coli chimicamente competente	ThermoFisher	C601003	20 fiale
Fosfato di sodio monobasico	pescatore	BP329-500	500 g
Tris Base	pescatore	BP152-1	1 kg
urea	pescatore	BP169-500	2,5 kg
attrezzatura
Fiberlite F14-14 x 50cy Rotore ad angolo fisso	ThermoFisher	Codice 096-145075	rotore
Sistema cromatografico NGC Quest 10	BioRad	7880001	FPLC per aiutare nella purificazione delle proteine
Sonifer 450	Branson	conosciuto anche come 096-145075	Sonicatore