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Costruzione di un modello murino umanizzato con immunità ingegnerizzata contro l'HIV

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Fonte: Zhen, A., et al. Immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro l'infezione da HIV nel modello murino umanizzato. J. Vis. Exp. (2016).

Il video dimostra una tecnica per generare un modello murino umanizzato con immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro il virus dell'immunodeficienza umana (HIV). Il tessuto del timo fetale umano e le cellule staminali ematopoietiche (HSC) ingegnerizzate vengono impiantate nella capsula renale di un topo gravemente immunocompromesso. Le HSC, che esprimono i recettori chimerici dell'antigene (CAR) contro l'HIV, sono mescolate in una miscela proteica gelatinosa che ne promuove la co-localizzazione con il tessuto del timo. Dopo la procedura, le HSC si differenziano in varie cellule immunitarie umane, con conseguente sviluppo di un modello murino umanizzato con un sistema immunitario umano funzionale contro l'HIV.

Protocol

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Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto. Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Costruzione di Topi Umanizzati Ingegnerizzati con il Recettore Chimerico dell'Antigene CD4

  1. Elaborazione del timo fetale e isolamento delle HSC CD34+ dal fegato fetale
    1. Lavorazione del timo
      1. Lavare delicatamente il timo in soluzione ....

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Disclosures

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Kit di microsfere CD34MiltenyiCodice 130-046-702Per la selezione di cellule progenitrici CD34+ umane
BambankerWakoCodice 302-14681per cella di congelamento
Kit di RNA virale QIAampQiagenCodice: 52904Per misurare la carica virale nel siero
Citometro a flusso MACSQuantMiltenyiPer l'analisi del flusso
BD LSRFortessa™BD bioscienzePer l'analisi del flusso
ialuronidasisigmaH6254-500MGPer la digestione dei tessuti
Desossiribonucleasi IWorthingtonLS002006per digestione dei tessuti
CollagenasiTecnologia di vitaCodice 17104-019per digestione dei tessuti
Sistema di rilevamento PCR in tempo reale CFXBioradPer misurare la carica virale e l'espressione genica
Topi, ceppo NOD. Cg-Prkdcscid Il2RGTM1Wjl/SzJIl laboratorio JacksonCodice: 5557Per la costruzione dei topi umanizzati
Penicillina Streptomicina (Pen Streptomic)Thermo Fisher Scientifico10378016Per la coltura di cellule
piperacillina/tazobactamPfizerZosynAntimicotico
Amfotericina B (antimicotico Fungizone)Thermo Fisher ScientificoCodice 15290-018Antimicotico
Clip avvolte AUTOCLIP, 9 mm - 1000 unitàBecton Dickinson427631Per chirurgia
Camici chirurgici Aurora sterili poli-rinforzati, 30 per confezioneMedlineDYNJP2707Per chirurgia
Suture, 4-0, vicrylOwens e Minor23000J304HPer chirurgia
Tamponi per la preparazione dell'alcolOwens e Minor3583006818Per chirurgia
Guanti chirurgici 6 1/2Owens e Minor4075711102Per chirurgia
Terreno a cellule T privo di siero di YsselBioprodotti Gemini400-102Per la trasduzione cellulare CD34+
Albumina sierica umanaSigma-AldrichCodice: A9511Per la trasduzione cellulare CD34+

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Humanized Mouse ModelEngineered ImmunityHIV InfectionHematopoietic Stem CellsChimeric Antigen ReceptorsFetal Thymus TissueRetro orbital InjectionKidney Capsule ImplantationGelatinous Protein MatrixHuman Immune System

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