Un test in vitro per lo screening degli interferoni come potenti inibitori della crescita del virus Zika

In questo articolo

Abstract

Fonte: Contreras, D. et al., di coltura cellulare infettiva del virus Zika e l'effetto profilattico in vitro degli interferoni. J. Vis. Exp. (2016)

Il video mostra un test in vitro per lo screening degli interferoni con attività antivirale contro il virus Zika, un patogeno umano. All'interno della cellula ospite, il virus Zika subisce la moltiplicazione dopo l'internalizzazione, infettando le cellule vicine e creando zone distinte o placche virali. L'interferone di tipo I, agendo come agente antivirale, ostacola la moltiplicazione del virus, prevenendo così la formazione di placche virali nel monostrato della cellula ospite.

Protocollo

1. Screening della libreria di citochine contro l'infezione da virus Zika

Seminare cellule Vero naive a 1 x 10⁵ cellule per pozzetto utilizzando una piastra a 12 pozzetti. Una volta che le cellule sono state attaccate (6 ore dopo la semina), aggiungere ciascuna citochina a
concentrazioni indicate in duplicati biologici (2 ml di volume/pozzetto). Includere il solo controllo del veicolo (PBS).
A 12 ore dopo il trattamento, eseguire l'infezione virale Zika (MOI di 0,1 in 400 μl per pozzetto). Includere pozzetti di controllo negativo senza infezione (simulazione).
A 4 ore dall'infezione, sostituire l'inoculo virale con terreni trattati con citochine (2 ml). Incubare le cellule a 37 °C per altre 44 ore.
A 48 ore dall'infezione, contare le placche virali utilizzando un microscopio a contrasto di fase e acquisire immagini rappresentative delle cellule infette con un ingrandimento di 40X (Figura 1).

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Risultati

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Figura 1: Gli interferoni dimostrano una potente attività virale anti-Zika. (A) Grafico che mostra la modulazione della crescita virale di Zika da parte di varie citochine rispetto a quella del controllo del veicolo. I valori medi e la deviazione standard sono mostrati nel grafico a barre. Gli interferoni hanno mostrato un'inibizione statisticamente significativa del...