Differenziazione delle cellule staminali neuronali umane in colture 3D utilizzando un'impalcatura porosa

Abstract

Fonte: Stevanato, L. et al., Differenziazione di una linea di cellule staminali neurali umane su colture tridimensionali, analisi di microRNA e geni bersaglio putativi. J. Vis. Exp. (2015)

Questo video mostra lo sviluppo e la differenziazione delle cellule staminali neurali umane all'interno di un'impalcatura tridimensionale. Un rivestimento di laminina sull'impalcatura favorisce l'adesione cellulare, mentre un mezzo neurale privo di fattore di crescita induce la differenziazione cellulare in cellule progenitrici neurali, che estendono i loro processi all'interno di un'architettura porosa in più direzioni, formando una coltura tridimensionale

Protocol

1. Differenziazione HNSC sulla cultura tridimensionale (3D)

NOTA: Isolare e derivare cellule staminali neurali umane (hNSC) da un tessuto eticamente approvato descritto in una precedente pubblicazione. Si prega di seguire le linee guida etiche e istituzionali nel seguire questa procedura.

1. Coltura 3D con piastra a 12 pozzetti
   1. Utilizzare una tecnica asettica durante tutta la procedura. In una cappa di sicurezza biologica, reidratare gli scaffold aggiungendo 2 ml/pozzetto di etanolo al 70% preparato utilizzando acqua per l'irrigazione (WFIr). Evitare di toccare le impalcature erogando i....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM:F12	Invitrogen	Codice 21331-020	Per la preparazione del mezzo RMM
Soluzione di albumina umana	Baxter assistenza sanitaria limitata	1501052	Per il mezzo RMM utilizzato a una concentrazione finale dello 0,03%
Transferrina, ricombinante umano	sigma	T8158	Per il terreno RMM utilizzato a una concentrazione finale di 5 μg/ml
Putrescina DiHCl	sigma	P5780	Per il terreno RMM utilizzato a una concentrazione finale di 16,2 μg/ml
Insulina, Ricombinante Umano	sigma	I9278	Per il terreno RMM utilizzato a una concentrazione finale di 5 μg/ml
progesterone	sigma	P6149	Per il terreno RMM utilizzato a una concentrazione finale di 60 ng/ml
L-Glutammina	Invitrogen	Codice 25030-24	Per il terreno RMM utilizzato a una concentrazione finale di 2 mM
Selenito di sodio	sigma	S9133	Per il mezzo RMM utilizzato a una concentrazione finale di 40 ng/ml
bFGF	Peprotech	AF-100-15	Da aggiungere al terreno RMM, utilizzato a una concentrazione finale di 10 ng/ml
FEG	Peprotech	AF-100-188	Da aggiungere al terreno RMM, utilizzato a una concentrazione finale di 20 ng/ml
4 OHT	sigma	H7904	Da aggiungere al mezzo RMM, utilizzato a una concentrazione finale di 100 nM
Laminina	AMS Biotecnologie	3400-010-10
Acqua per l'irrigazione	Baxter Sanità	UKF7114
Piastra Alvetex a 12 pozzetti	Reinnervate Ltd	AVP002
etanolo	Merck	Codice 1.00986.1000