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Generazione di giunzioni neuromuscolari utilizzando un dispositivo microfluidico

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Stoklund Dittlau, K. et al., Generazione di unità motorie umane con giunzioni neuromuscolari funzionali in dispositivi microfluidici.J. Vis. Exp. (2021)

Il video mostra la formazione di giunzioni neuromuscolari utilizzando un dispositivo microfluidico. Le cellule precursori neurali e le cellule progenitrici muscolari vengono seminate in diversi pozzetti all'interno del dispositivo e lasciate maturare rispettivamente in motoneuroni e miotubi. La creazione di un gradiente volumetrico e chimico porta allo sviluppo di giunzioni neuromuscolari attive.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

Tutti i reagenti e le attrezzature utilizzate in questo protocollo sono elencati nella Tabella dei Materiali e devono essere utilizzati sterili. Il supporto deve essere riscaldato a temperatura ambiente (RT) prima dell'uso, se non diversamente specificato. Per una panoramica del protocollo di co-coltura, vedere la Figura 1.

1. Differenziazione dei progenitori dei motoneuroni dalle cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC)

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

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Figura 1: Panoramica schematica del protocollo dell'unità motore nei dispositivi microfluidici.Cronologia della differenziazione e panoramica della co-coltura dal giorno 0 al giorno 28 secondo la sequenza temporale del protocollo di differenziazione dei motoneuroni. La differenziazione dei motoneuroni dalle iPSC viene iniziata al giorno 0 ed eseguita come indicato in precedenza per i successivi 10 gi.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
acido aceticoCHEM-Lab NVCL00.0116.1000Componente di rivestimento. H226, H314. P280
Agrin (proteina umana ricombinante)Sistemi di ricerca e sviluppo6624-AG-050Supplemento per i media
acido ascorbicosigmaCodice: A4403Componente multimediale
βIII-tubulina ( Tubulina )Abcamab7751Anticorpi (1:500)
β-mercaptoetanoloThermo Fisher Scientifico31350010Componente multimediale. H317. P280.
B-27 senza vitamina AThermo Fisher ScientificoCodice 12587-010Componente multimediale
BDNF (fattore neurotrofico derivato dal cervello)Peprotech450-02BFattore di crescita
bFGF (fattore di crescita dei fibroblasti basici umani ricombinanti)Peprotech100-18BFattore di crescita
Collagene da pelle di vitelloThermo Fisher Scientifico17104019Componente di rivestimento
CNTF (fattore neurotrofico ciliare)Peprotech450-13BFattore di crescita
REPARTOTocris BioscienceCodice: 2634Supplemento per i media
DMEM/F12Thermo Fisher Scientifico11330032Componente multimediale
DmsosigmaD2650-100MLComponente di crioconservazione. H315, H319, H335. P280.
Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (DPBS)Thermo Fisher Scientifico14190250senza calcio, senza magnesio
etanoloVWR20.821.296sterilizzazione. H225. P280
Siero fetale bovinoThermo Fisher Scientifico10270106Componente multimediale
Mezzo di montaggio a fluorescenzaDakoS3023Componente di immunocitochimica
GDNF (fattore neurotrofico derivato dalla linea cellulare gliale)Peprotech450-10BFattore di crescita
Siero per cavalliThermo Fisher Scientifico16050122Componente multimediale
IMDMThermo Fisher Scientifico12440053Componente multimediale
Insulina transferrina selenioThermo Fisher Scientifico41400045Componente multimediale
Sostituzione del siero knockoutThermo Fisher ScientificoCodice 10828-028Componente di crioconservazione
Laminina dalla membrana basale del sarcoma murino di Engelbreth-Holm-SwarmsigmaL2020-1MGComponente di rivestimento e integratore ai mezzi
L-glutamminaThermo Fisher ScientificoCodice 25030-024Componente multimediale
Supplemento N-2Thermo Fisher ScientificoCodice 17502-048Componente multimediale
Terreno neurobasaleThermo Fisher Scientifico21103049Componente di rivestimento e media
Aminoacidi non essenzialiThermo Fisher Scientifico11140050Componente multimediale
Parafilm MsigmaP7793-1EAStoccaggio dell'attrezzatura
Penicillina/Streptomicina (5000 U/mL)Thermo Fisher Scientifico15070063Componente multimediale
Piastra di Petri (3 cm)Nunc153066Diametro: 3 cm
Piastra di Petri (10 cm)SarstedtCodice 833.902Diametro: 10 cm
Piastra (6 pozzetti)Cellstar Greiner bio-oneCodice 657160Piastra di coltura
Poli-L-ornitina (OLP)sigmaP3655-100MGComponente di rivestimento
Acido retinoicosigmaCodice: R2625Supplemento per i media. H302, H315, H360FD, H410. P280.
Integratore cellulare RevitaThermo Fisher ScientificoA2644501Soluzione inibitrice ROCK
Agonista levigatoMerch MilliporeCodice: 566660Supplemento per i media
Piruvato di sodioTecnologie per la vitaCodice 11360-070Componente multimediale
Pallone T75sigmaCLS3276Piastra di coltura
TrypLE espressoThermo Fisher Scientifico12605010Soluzione di dissociazione MAB
Tubocirarina cloridrato pentaidratosigmaT2379-100GBloccante del recettore dell'acetilcolina. H301. P280.
Dispositivo microfluidico preassemblato XonaChipsXona MicrofluidicaXC150Lunghezza microscanalature: 150 μm

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Neuromuscular JunctionsMicrofluidic DeviceNeural Progenitor CellsMuscle Progenitor CellsMotor NeuronsMyotubesMicrogroovesCell SeedingGrowth MediumDifferentiation Medium

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