Riprogrammazione neuronale diretta di astrociti di topo in neuroni

In questo articolo

Abstract

Fonte: Hersbach, B. A. et al., Isolamento e riprogrammazione neuronale diretta di astrociti di topo. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video mostra la riprogrammazione diretta degli astrociti che esprimono fattori di trasformazione in neuroni. I fattori di trasformazione innescano una cascata di eventi molecolari che facilitano la conversione da astrociti a neuroni. Il processo è ulteriormente supportato dalla fornitura di agenti specifici e integratori attraverso un mezzo di differenziazione neuronale.

Protocollo

1. Semina di astrociti per la riprogrammazione

NOTA: I seguenti passaggi devono essere eseguiti sotto una cabina di sicurezza biologica con un livello di sicurezza 1 (SL1).

Preparare piastre a 24 pozzetti con vetrini coprioggetti rivestiti di poli-D-lisina nello stesso modo in cui venivano preparati in precedenza i flaconi di coltura. Per determinare il numero di piastre necessarie, si consideri che gli astrociti sono placcati a una densità di 5-5,5 x 10⁴ celle per pozzetto in una piastra a 24 pozzetti. Di solito, isolando sei topi del midollo spinale dal giorno 2 postnatale (P2) si ottengono circa 1 ....

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Risultati

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Figura 1: Cenni sulla coltura degli astrociti e sulla riprogrammazione. (A)Cronologia della conversione diretta da astrocita a neurone. Ogni linea nera rappresenta un passaggio importante nel protocollo. (B) Immagini rappresentative in campo chiaro di astrociti in coltura derivati dal midollo spinale dopo 7 giorni di coltura. Le immagini sono state scattate utilizzando un microscopio a campo chiaro e.......