Isolamento e coltura di cellule staminali neurali adulte dalla zona sottocallosa del topo

Abstract

Fonte: Kim, J. Y., et al. Isolamento e coltura di cellule staminali neurali adulte dalla zona sottocallosa del topo. J. Vis. Exp. (2016)

Il video mostra il processo di isolamento e coltura delle cellule staminali neurali dalla zona sottocallosa del cervello del topo. Comporta la dissezione dei tessuti, la dissociazione enzimatica e la loro coltura con fattori di differenziazione per svilupparsi in cellule neurali mature.

Protocollo

1. Preparazione dei materiali e terreno di coltura

1. Per la dissezione e la dissociazione della SCZ (zona sottocallosa), avvolgere la matrice cerebrale, la lama del rasoio a doppio taglio e la pinza con un foglio di alluminio, quindi sterilizzarli in autoclave.
2. Preparare 50 ml di tampone PBS (soluzione salina tamponata con fosfato) freddo per lavare l'intero cervello del topo.
3. Installare un microscopio da dissezione e preparare gli strumenti chirurgici necessari per la dissezione del cervello (forbici e pinze autoclavate) e l'isolamento della SCZ (siringa da 1 ml, ago da 30 G, matrice cerebrale e pinza fine).
4. Preparazione di N2 ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
DMEM/F12	Gibco	Codice 11320-033	L-glutammina, Bicarbonato di sodio
Penna/Streptococco	Invitrogen	Codice: 15140-122
Integratore N2	Gibco	Codice 17502-048
Supplemento B27	Gibco	Codice 17504-044
bFGF	Ricerca e Sviluppo	233-FB
FEG	Gibco	PHG0313
PBS (10X)	BIOSOLUZIONE	BP007a	Diluizione 1X
S.b.B	Gibco	Codice 14175-095
Applicazione II	Roche	04-942-078-001
papaina	Worthington	Telefono 3126
Accutase	tic	AT-104
Pinze fini	WPI	Codice: 555229F
forbici	Storz	E3321-C
Matrice cerebrale (1 mm)	Rwd	Codice 68707
Rasoio a doppio taglio	DORCO	ST-300
Ago da 30 calibri	SUNGSHIM	N1300
Tubi da 15 ml	Spl	Codice: 50015
Tubi da 50 ml	Spl	Codice: 50050
Piatto da 35 mm	Spl	Codice 10035	petrido
Piatto da 100 mm	Spl	Codice 10090	petrido
Vetrino coprioggetto (18 mm)	Deckglaser	Codice: 111580
Piatto da 12 pozzetti	Spl	Ore 32012	non rivestimento
Piatto a 6 pozzetti	Spl	Codice: 32006	non rivestimento
Plo	sigma	P4957	0,01%
Laminina	Gibco	Codice 23017-015	10 mg/ml
Nidina	Millipore	Visualizzazione MAB353	mouse (1:1000)
BrdU	Abcam	ab6326	Ratto (1:500)
penicillina
streptomicina
Microscopio da dissezione
centrifuga
Pipetta P1000
Bagnomaria
Incubatore a CO2
Tripan blu
ematocitometro

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