Generazione di cellule simili a cellule di Schwann da cellule stromali del midollo osseo

Abstract

Fonte: Tsui, Y., et al. Precondizionamento ipossico delle cellule progenitrici derivate dal midollo come fonte per la generazione di cellule di Schwann mature.J. Vis. Exp. (2017)

Questo video mostra un metodo per ottenere cellule simili a cellule di Schwann da cellule stromali multipotenti del midollo osseo (BMSC). Inizialmente, le BMSC vengono sottoposte a trattamento di ipossia, seguito da una differenziazione diretta in cellule progenitrici neuronali. Successivamente, vengono impiegati terreni e condizioni di coltura specifici per indurre la trasformazione di queste cellule progenitrici in cellule simili alle cellule di Schwann.

Protocollo

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Preparazione delle colture MSC per ratti

1. Prelievo di MSC dal femore
   1. Autoclavare in autoclave tutti gli strumenti di dissezione (ad es. forbici da dissezione fine, forbici da taglio a punta smussata e pinze dentate) a 180 °C per almeno 2 ore prima dell'uso.
   2. Preparare un terreno di crescita MSC composto da un terreno essenziale minimo - modificazione alfa (αMEM) integrato con il 15% di siero fetale bovino (FBS) e penicillina/streptomic....

Risultati

Figura 1: Costituzione di colonie di MSC. Colonie di MSC di grandi dimensioni dovrebbero essere visibili 6-7 giorni dopo la placcatura delle cellule del midollo osseo su plastica per colture tissutali. Viene mostrata un'immagine rappresentativa di una colonia di MSC di ratto (A), mentre le colonie umane mostrano un aspetto simile. Le colonie possono essere passate il giorno 10. Osser.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
αMEM	Sigmaaldrich	Codice: M4526
DMEM/F12	Thermofisher scientifico	Codice 12400-024
FBS	Biosieri	FB-1280/500
B27	Thermofisher scientifico	Codice 17504-001
Fattore di crescita epidermico (EGF)	Thermofisher scientifico	PHG0313
Fattore di crescita basico dei fibroblasti (bFGF)	Peprotech	100-18B/100UG
Fattore di crescita derivato dalle piastrine-AA (PDGF-AA)	Peprotech	100-13A
Heregulin beta-3, dominio EGF (β-Her)	Millipore	01-201
Poli-D-lisina (PDL)	Sigmaaldrich	P7886-1G
Laminina	Thermofisher scientifico	23017015
Penicillina / streptomicina (P/S)	Thermofisher Scientifico	Codice: 15140-122
TrypLE Express	Thermofisher Scientifico	Codice 12604-013
Piatto da 10 cm per coltura aderente	TPP	Codice 93100	Utilizzato per la selezione delle MSC
Piastra a 6 pozzetti per colture aderenti	TPP	Codice: 92006	Utilizzato per l'espansione delle MSC dopo il passaggio
Piastra UltraLow a 6 pozzetti per coltura non aderente	Corning	3471	Utilizzato per l'arricchimento dei progenitori neurali
anti-umano CD90(Thy-1)	BD Bioscienze	555593
anti-umano CD73	BD Bioscienze	550256
anti-umano/ratto STRO-1	Sistemi di ricerca e sviluppo	MAB1038
anti-umano CD45	BD Bioscienze	Codice: 555480
Camera di ipossia	Billups-Rothenberg	MIC-101
Tampone HEPES	Sigmaaldrich	H4034-100G
anti-ninestina umana	Sistemi di ricerca e sviluppo	MAB1259
anti-ratto CD90(Thy-1)	BD Bioscienze	554895
antiratto CD73	BD Bioscienze	551123
anti-nestina di ratto	BD Bioscienze	MAB1259
antiratto CD45	BD Bioscienze	554875
Anti-S100β	Dako	Z031101
Anti-p75	Millipore	MAB5386
Anti-GFAP	Sigmaaldrich	G3893
Tubulina anti-beta di classe III (Tuj-1)	Covance	MMS-435P
Nuclei anti-umani	Millipore	MAB1281