Sviluppo di un modello 3D ingegnerizzato basato su seta-collagene di tessuto neurale polarizzato

Abstract

Fonte: Chwalek, K. et al., Modello ingegnerizzato basato su seta-collagene di tessuto neurale polarizzato. J. Vis. Exp. (2015).

Questo video mostra la creazione di un modello di tessuto neurale polarizzato in 3D utilizzando scaffold di seta-collagene. Descrive in dettaglio il processo di semina delle cellule neuronali su scaffold di seta porosa, l'incubazione per l'attaccamento cellulare, l'incorporazione dell'impalcatura con il collagene e sottolinea l'importanza della matrice di collagene di supporto nella formazione di un modello di tessuto neurale polarizzato 3D.

Protocol

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Preparazione dell'impalcatura in seta

1. Preparazione della soluzione di seta dai bozzoli di Bombyx mori
   1. Taglia ogni bozzolo in 8 pezzi uguali usando le forbici. Utilizzare circa 11 bozzoli per 5 g di bozzoli frammentati. (15 minuti)
   2. Preparare 2 L di soluzione 0,02 M Na₂CO₃ e far bollire con una piastra calda. (15 minuti)
   3. Pesare 5 g di bozzoli frammentati e farli bollire in soluzione di Na₂CO₃ per 3....

Results

Figura 1. Stampo in PTFE utilizzato per la preparazione di impalcature in spugna di seta. Le dimensioni: 10 cm di diametro, 2 cm di altezza.

Figura 2. Modello 3D di tessuto simile al cervello. (A) Impalcatura porosa in spugna di seta. (B)

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Centrifuga 5804 R	Eppendorf
poli-D-lisina	Sigma-Aldrich	P6407-5MG	concentrazione finale 10 μg/ml, disciolto in acqua
Terreno neurobasale	Gibco	21103049	riscaldare fino a 37 °C prima dell'uso
Supplemento B27 50x	Gibco	17504-044
Glutamax	Gibco	35050-061
Penicilina Streptomicina	Corning	30-002-CI
Collagene I, coda di ratto, 100 mg	Corning	354236	concentrazione finale 3 mg/ml
NaOH	Sigma-Aldrich	S2770	corrosivo
PBS	Sigma-Aldrich	D1283-500ML
Na2CO3	Sigma-Aldrich	223530
LiBr	Sigma-Aldrich	213225
Cassette per dialisi MWCO 3500	Thermo Fisher	66110
Piastra riscaldante	Fisher Scientific	Isotemp
Setacciamento	Fisher Scientific	n. 270, n. 35, n. 30
PTFE			stampo fatto in casa (Figura 1) 10 cm di diametro, 2 cm di altezza
NaCl	Sigma-Aldrich	71382
Punzone per biopsia 5 mm	Strumento di precisione mondiale	501909
Punzone per biopsia 2 mm	Strumento di precisione mondiale	501908
tripsina	Sigma-Aldrich	T4049-500ML
DNase	Roche	10104159001	concentrazione finale 0,3%
Proteine della soia	Sigma-Aldrich	T6522-100MG	concentrazione finale 1 mg/ml