Isolamento di colonie di cellule progenitrici neurali indotte derivate da fibroblasti umani adulti

Abstract

Fonte: Meyer, S. et al., Derivazione di fibroblasti umani adulti e loro conversione diretta in cellule progenitrici neurali espandibili.J. Vis. Exp. (2015).

Questo video mostra una tecnica per isolare le cellule progenitrici neurali indotte (iNPC) derivate da fibroblasti umani adulti. Delinea le fasi dell'isolamento delle colonie di iNPC e della loro coltura in pozzetti a piastre multipozzetto rivestiti di laminina in presenza di terreni di coltura adeguati che facilitano la continua proliferazione ed espansione della popolazione di iNPC.

Protocollo

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Isolamento di colonie di cellule progenitrici neurali indotte putative (iNPC)

1. Un giorno prima di raccogliere le colonie di iNPC, rivestire una piastra da 48 pozzetti con laminina: diluire la laminina a 1 μg/ml nella soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (DPBS), aggiungere 300 μl della soluzione sulle piastre e mantenere a 4 °C per 24 ore. Il giorno dopo, aspirare la laminina dalle piastre e aggiungere 200 μl di terreno di neuroinduzione (1:1 DMEM/F-12:Neurobasal, 1x N2....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
CHIR99021	Assone medchem	Anno 1386
DMEM F12	Tecnologie di vita	Codice 11320-033
DPBS	Tecnologie di vita	Codice 14190-094
GlutaMAX	Tecnologie di vita	Codice 35050-038
hLIF	Peprotech	300-05
Laminina	sigma	L2020
N2	Tecnologie di vita	Codice 17502-048
Neurobasale	Tecnologie di vita	Codice 21103-049
SB431542	Invivogen	inh-SB43
Y27632	Calbiochem	CAS 146986-50-7
B27	Tecnologie di vita	Codice 17504-044