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Isolamento di cellule dai gangli sensoriali

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Kaelberer, M. M., et al. Un metodo per indirizzare e isolare i neuroni sensoriali che innervano le vie aeree nei topi. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video dimostra l'isolamento delle cellule dai gangli sensoriali dei topi. I gangli sono sottoposti a digestione enzimatica per sciogliere la matrice extracellulare. Le singole cellule vengono quindi raccolte mediante filtraggio attraverso un filtro a celle seguito da una centrifugazione in gradiente di densità per la rimozione dei detriti. Infine, vengono eseguiti il lavaggio e la centrifugazione per raccogliere le cellule isolate per analisi future.

Protocol

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Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Dissociazione dei gangli sensoriali

  1. Pipettare 500 μl di soluzione di dissociazione dei gangli (GaDS) (Tabella 1), lasciando i gangli nella provetta. Lavare i gangli una volta aggiungendo 1 ml di soluzione tampone fosfato (PBS), attendere che i gangli si depositino sul fondo della provetta, quindi pipettare il PBS.
  2. Aggiungere 1 ml di GaDS e 22 μl di enzima di digestione (collagenasi I/II e miscela di proteasi, 2,5 mg/ml in acqua) in ciascuna provetta.
  3. ....

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Disclosures

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) di Dulbecco senza Ca e MgGibcoCodice 14190-144
DMEM/F12 avanzatoGibcoCodice 12634-010
glutammina (Glutamax)GibcoCodice 35050-061
HEPESGibcoCodice 15630-080
N2GibcoCodice 17502-048
B27 (senza vitamina A)GibcoCodice 12587-010
Fattore di crescita nervoso (NGF)sigmaN6009brodo 50 μg/ml in PBS/10% FBS
enzima della digestione, Liberase DH Research GradeRoche54010540012,5 mg/ml in acqua
soluzione di particelle (Percoll)sigmaP1644-25ML
Blocco riscaldanteRete LabNet
Filtro cellulare da 70 umFalconeCodice 352350

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Tags

Sensory GangliaCell IsolationEnzymatic DigestionDensity Gradient CentrifugationCell StrainerPhosphate BufferGanglia DissociationSingle Cell SuspensionDebris RemovalCentrifugation Wash

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