Un idrogel a base di acido ialuronico per la coltura tridimensionale di cellule di glioblastoma

Abstract

Fonte: Xiao, W., et al. Idrogel a base di acido ialuronico per colture tridimensionali di cellule di glioblastoma derivate da pazienti. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video dimostra come le gliomasfere, derivate da tumori cerebrali, vengono separate in singole cellule e incapsulate in un idrogel a base di acido ialuronico. Questo processo promuove le interazioni cellula-cellula, formando un modello di glioblastoma strutturato e tridimensionale.

Protocol

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Tiolazione dell'acido ialuronico

NOTA: I rapporti molari sono indicati rispetto a un numero totale di gruppi carbossilati se non diversamente specificato.

1. Sciogliere 500 mg di ialuronato di sodio (HA, 500-750 kDa) a 10 mg/mL in acqua distillata deionizzata (DiH₂O) in un pallone di Erlenmeyer da 250 mL sterilizzato in autoclave. Mescolare la soluzione (~200 giri/min) a temperatura ambiente per 2 ore per sciogliere completamente....

Results

Tabella 1. Formulazioni di idrogel che consentono un controllo indipendente della concentrazione di HA e delle proprietà meccaniche.

Tipo di gel	Parte A (40 μL ciascuno)			Parte B (40 μL ciascuno)
	4Arm-PEG-MAL (50mg/mL)

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Misuratore di pH	Thermo Fisher	N/A	Qualsiasi pHmetro con sensibilità al pH 2-10
Piastra di agitazione	Thermo Fisher	N/A	Attrezzature generali di laboratorio
Pallone di Erlenmeyer (125mL)	Thermo Fisher	FB-501-125
Bicchiere in polipropilene da 2 litri	Thermo Fisher	S01916
sodio	Nucleo vitale	HA700k-5	Intervallo 500-750 kDa
1-etil-3-(3-dimetilamminopropil) carbodiimmide (EDC)	Thermo Fisher	Modello/DI-22980
N-idrossisuccinimide (NHS)	Sigma Aldrich	Codice 130672-5G
Acido cloridrico (HCl)	Thermo Fisher	SA48-500
Idrossido di sodio (NaOH)	Thermo Fisher	SS266-1
Cistamina dicloridrato	Thermo Fisher	AC111770250
Ditioltreitolo (DTT)	Thermo Fisher	BP172-25
Reagente per il test di Ellman (acido 5-(3-carbossi-4-nitrofenil)disolfanil-2-nitrobenzoico	Sigma Aldrich	D218200-1G
Acqua deuterata (ossido di deuterio)	Thermo Fisher	AC166301000
Filtro a vuoto da 0,22 μm	CellTreat	229706
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)	Thermo Fisher	P32080-100T
Soluzione salina bilanciata di Hanks (HBSS)	Thermo Fisher	MT-21-022-CV
4 bracci-PEG-maleimmide	Tecnologia JenKem	Codice: A7029-1	peso molecolare intorno a 20kDa
a 4 bracci-PEG-tiolo	Tecnologia JenKem	A7039-1	peso molecolare intorno a 20kDa
L-Cisteina	Sigma Aldrich	C7880-100G
Peptide mimetico RGD ECM	Genscript Biotech	N/A	Peptide personalizzato con sequenza "GCGYGRGDSPG", N-terminale deve essere acetilato
Stampi in silicone	Sigma Aldrich	GBL664201-25EA	Usa la lama del rasoio per tagliare in pezzi singoli
Terreno di coltura completo	diverso	diverso	DMEM/F12 (Thermofisher) con integratore non sierico (G21 di GeminiBio), fattore di crescita epidermico 50 ng/mL (Peprotech), fattore di crescita dei fibroblasti 20 ng/mL (Pepro Tech) ed epraina 25 μg/mL (Sigma Aldrich), il terreno di coltura varia nei diversi laboratori
Cellula GBM derivata dal paziente	N/A	N/A
Mini compressa di inibitore della proteasi/fosfatasi	Sigma Aldrich	5892970001
TrypLE espresso	Thermo Fisher	12604013
Filtro cellulare da 70μm	Thermo Fisher	Codice 22-363-548
Incubatore per colture cellulari	Thermo Fisher	N/A	Qualsiasi generale con il 5% di CO2 e 37C
Frigorifero/congelatore	Thermo Fisher	N/A	Qualsiasi attrezzatura di laboratorio generale con capacità di -20C e -80C
Stampi per inclusione monouso	Thermo Fisher	12-20
Puntali per pipette a orifizio largo	Thermo Fisher	9405120