Dissociazione e coltura di neuroni da campioni di tessuto ippocampale

Abstract

Fonte: Servello, D. et al., Un sistema microbiomeccanico per lo studio della formazione e del recupero delle varici negli assoni dei neuroni centrali. J. Vis. (2018).

Questo video dimostra la dissociazione e la coltura dei neuroni dell'ippocampo da campioni di tessuto dell'ippocampo utilizzando dissociazioni enzimatiche e meccaniche. Il trattamento con Ara-C inibisce la crescita delle cellule non neuronali, facilitando la crescita selettiva dei neuroni dell'ippocampo.

Protocollo

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Dissezione, dissociazione e coltura dei neuroni dell'ippocampo da un topo/ratto gravido

1. Dissezione e dissociazione dei neuroni ippocampali per la coltura
   1. Scongelare la soluzione enzimatica di proteasi (3 mg/mL di proteasi 23 in soluzione di dissezione Slice, SLDS, Tabella 1) e il terreno di placcatura pre-riscaldato (Tabella 2) a 37 °C.
   2. Sezionare l'ippocampo e risciacquare con SLDS.
      nota:

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Vetrini coprioggetti da 12 mm	Strumenti Warner	64-0702	Per piastra a 24 pozzetti
Vetrini coprioggetti da 25 mm	Fisher Scientifico	12-545-102	Per piastra a 6 pozzetti
acido acetico	Fisher Scientifico	A38-212
Poli-D-lisina	sigma	P6407
Collagene di coda di ratto	Roche	11 179 179 001
10X PBS	Diagnostica Nazionale	CL-253
Na2SO4	Fisher Scientifico	S373-500
K2SO4	Fisher Scientifico	P304-500
HEPES	Fisher Scientifico	BP410-500
D-glucosio	Fisher Scientifico	D16-500
MgCl2	Fisher Scientifico	BP214-500
NaOH	Fisher Scientifico	SS255-1
Enzima proteasi	sigma	P4032
FBS	Gibco	Codice 26140
Piruvato di sodio	Gibco	Codice 11360-070
L-glutammina	Gibco	25030081
Penicillina/Streptomicina 100x (P/S)	Gibco	15140122
MEM Sali di Earle	Gibco	Codice 11090
Supplemento B27	Gibco	Codice 17504-044
Neurobasale	Gibco	Codice 21103-049
Arabinosilcitosina (Ara-C)	sigma	Codice 147-94-4
Supporti Opti-MEM	Gibco	Codice 31985-070