Articolo metodologico

Un metodo di co-coltura per modellare le interazioni neurone-oligodendrocita

8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

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Fonte: Assetta, B., et al. Generazione di neuroni umani e oligodendrociti da cellule staminali pluripotenti per la modellazione delle interazioni neurone-oligodendrociti. J. Vis. Exp. (2020).

Questo video dimostra la creazione di una co-coltura di neuroni indotti umani (iNs) e cellule precursori di oligodendrociti indotti (iOPC). Gli iN vengono mescolati con iOPC in una co-coltura e poi incubati per supportare la maturazione di entrambi gli iN in neuroni e degli iOPC in oligodendrociti. I neuroni formano connessioni sinaptiche con altri neuroni e oligodendrociti, mentre gli oligodendrociti sviluppano guaine mieliniche attorno agli assoni dei neuroni.

Protocollo

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1. Induzione di neuroni umani da cellule staminali pluripotenti umane

  1. Preparazione lentivirus (~5 giorni)
    1. Piastra ~ 1 milione di cellule 293T (HEK293T) del rene embrionale umano per ogni fiaschetta T75, per averle ~40% confluenti durante l'esecuzione della trasfezione. Trasfettali con plasmidi che esprimono la neurogenina 2 inducibile dalla tetraciclina (Ngn2) e il gene resistente alla puromicina (PuroR; sotto lo stesso controllo del promotore dell'operatore Tet (TetO)), il transattivatore inverso della tetraciclina (rtTA) e i tre plasmidi helper pRSV-REV, pMDLg/pRRE e VSV-G (12 μg di DNA vettore lentivirale e 6 μg di ciascuno ....

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Risultati

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Figura 1: Generazione diretta di neuroni indotti umani (iN) da hPSC. (A) Diagramma di flusso della generazione di iN. (B) Immagini rappresentative in campo chiaro e in immunofluorescenza della coltura iniziale di cellule staminali pluripotenti umane (H1) per confermare la pluripotenza. Oct4 è mostrato in rosso e Sox2 in verde. (C) Immagini rappresent.......

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Dichiarazioni

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
AccutaseTecnologie STEMCELLCodice: 7920
Supplemento B27ThermoFisher17504044
bFGFThermoFisherPHG 0266
accampamentoMilliporeSigmaCodice: A9501
ClemastinaMilliporeSigmaSML0445
DMEM/F12 medioTecnologie STEMCELLTelefono 36254
DmsoThermoFisherD12345
DoxiciclinaMilliporeSigmaD3072
Siero fetale bovinoScienCell10
Cellule ES umane H1WiCellWA01
MatrigelCorning354234
mTeSR plusTecnologie STEMCELLCodice: 5825
Integratore N2ThermoFisher17502001
Neurobasale A medioThermoFisherCodice 10888-022
Aminoacidi non essenzialiThermoFisherCodice 11140-050
PDGF-AASistemi di ricerca e sviluppo221-AA-010
PeiVWR71002-812
pMDLg/pRREAddgeneCodice: 12251
PolibreneMilliporeSigmaTR-1003-G
pRSV-REVAddgeneCodice: 12253
PuromicinaThermoFisherA1113803
Inibitore ROCK Y-27632Tecnologie STEMCELLCodice: 72302
abbassamentoTocris4366
Terreni di congelamento del progenitore neurale STEMdiffTecnologie STEMCELLCodice: 5838
Kit di induzione neurale STEMdiff SMADiTecnologie STEMCELLCodice: 8581
Triiodotironina T3MilliporeSigmaT6397
Tempo-iOlogo: OPC umane derivate da iPSCTempo BioScienceCodice SKU102
TetO-Ng2-PuroAddgeneCodice: 52047
VSV-GAddgeneCodice: 12259

Ristampe e permessi

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Tag

Co coltura di neuroni e oligodendrocitineuroni indotticellule precursori degli oligodendrociti indottedistacco cellularesospensione per centrifugazioneterreno di co colturaformazione della guaina mielinicaconnessioni sinaptichedifferenziamento degli OPCfattori trofici

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