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Un metodo per la generazione di terreno condizionato con oligodendrociti

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Mazuir, E., et al. Generazione di oligodendrociti e terreno condizionato con oligodendrociti per esperimenti di co-coltura. J. Vis. Exp. (2020)

Questo video dimostra la produzione di terreno condizionato con oligodendrociti (OCM) da cellule di lignaggio di oligodendrociti stressandole per migliorare il loro rilascio molecolare nel terreno. Questo terreno, ricco di fattori di crescita, citochine e altre molecole bioattive, può essere aggiunto alle colture di neuroni per ottenere informazioni sull'impatto dei fattori secreti dagli oligodendrociti sulla fisiologia e sulla connettività neuronale.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Raccolta e coltura di cellule del lignaggio OL (OL)

NOTA: Questi passaggi devono essere eseguiti in una cappa a flusso laminare in condizioni sterili.

  1. Il giorno dopo l'agitazione, preparare il terreno Bottenstein-Sato (BS) secondo la Tabella 1.
  2. Sciacquare le piastre di Petri rivestite 3 volte con acqua distillata sterile.
  3. Raccogliere il surnatante dei flaconi contenenti principalmente cellule del lignaggio OL, ma anche alcune cellule microgliali e impiattarlo su piastre di Petri da 100 mm non rivestite.
    nota: Questo....

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Supplemento B27ThermoFisher17504044
Soluzione di D-(+)-glucosiosigmaG8769
Aquila di Dulbecco modificata mediaThermoFisher31966021
Etanolo 100%sigma32221-M
Etanolo 70%Prodotti chimici VWRCodice 83801.36
Siero fetale di vitelloThermoFisher10082147
NeurobasaleThermoFisher21103049
Penicillina-StreptomicinaThermoFisher15140122
Soluzione salina tamponata con fosfato senza calcio e magnesioThermoFisherA1285601
Polietilenimmina (PEI)sigmaP3143
Bottenstein-Sato (BS) media
apo-transferrina umanasigmaT1147
BSA (albumina sierica bovina)sigmaVisualizzazione del materiale A4161
Aquila di Dulbecco modificata mediaThermoFisher31966021
insulinasigmaI5500
PDGFPeprotechAF-100-13A
Penicillina-StreptomicinaThermoFisher15140122
progesteronesigmaP8783
Putrescina dicloridratosigmaP5780
Selenito di sodiosigmaS5261
T3 (sale sodico di 3,3',5-Triiodo-L-tirolina)sigmaT6397
T4 (L-tiroxina)sigmaT1775
utensileria
Filtro da 0,22 μmSartoriusCodice: 514-7010
Siringa da 1 mlTerumo1611127
Piastra Petri da 100 mmDutscherCodice: 193100
Provetta da 15 mLCorning Scienze della Vita734-1867
Provetta da 50 mLCorning Scienze della Vita734-1869
Piastra Petri da 60 mmDutscherCodice 67003

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Oligodendrocyte Conditioned MediumOligodendrocyte Lineage CellsCell Attachment EnhancementNutrient Poor Medium IncubationMedium Filtration SterilizationBioactive Molecule SecretionOCM Storage PreservationPolymer Coated Petri DishHumidified Incubator ConditionsLaminar Flow Hood Sterility

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