Separazione magnetica delle cellule di Schwann dai nervi sciatici di topo

Abstract

Fonte: Blusch, A., et al., Mielinizzazione in vitro di assoni periferici in una cocoltura di espianti di ganglio della radice dorsale di ratto e cellule di Schwann. J. Vis. Exp. (2023)

Questo video mostra un metodo per isolare le cellule di Schwann dalle fibre del nervo sciatico di topo.

Protocollo

1. Coltura cellulare di Schwann

1. Rivestimento per colture cellulari di Schwann
   1. Rivestire le piastre per colture cellulari in condizioni sterili. Applicare 2 mL di poli-L-lisina (PLL) allo 0,01% su due piastre di coltura tissutale (TC) da 60 mm ciascuna e incubare per una notte a 4 °C.
   2. Rimuovere il PLL, lavare le piastre TC 2 volte con acqua distillata e incubare con 2 ml di 1 μg/cm² di laminina per una notte a 4 °C. Lavare le piastre TC 2 volte con acqua e lasciare asciugare le piastre all'aria.
2. Preparazione del terreno per la coltura cellulare di Schwann
   1. Preparare 50 mL ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Albumina sierica bovina	Carl Roth, Karlsruhe, Germania	8076.4
Filtro cellulare, 100 μM	BD Bioscience, Heidelberg, Germania	Codice 352360
Centrifuga 5810-R	Eppendorf AG, Amburgo, Germania	5811000015
incubatore a CO2 Heracell	Heraeus Instruments, Hanau, Germania	51017865
Applicazione II	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germania	4942078001
Acqua distillata (sistema di purificazione dell'acqua)	Millipore, Molsheim, Francia	ZLXS5010Y
DMEM/F-12, GlutaMAX	Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germania	31331093
DPBS (senza ioni calcio e senza ioni magnesio)	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germania	D8537-6X500ML
Fcs	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germania	F7524	FCS deve essere testato per la coltura cellulare di Schwann
Gentamicina	Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germania	5710064
HBSS (senza ioni calcio e senza ioni magnesio)	Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germania	14170138
Laminina	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germania	L2020-1MG
MACS Multistand	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germania	130042303
Microforbici	Fine Science Tools GmbH, Heidelberg, Germania	Codice 15000-08
microscopio	Motic, Wetzlar, Germania	Motic BA 400
Vetrino per microscopio	VWR, Radnor, Stati Uniti	630-1985
Separatore MiniMACS	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germania	130091632
Colonne MS	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germania	Codice 130-042-201
Camera di conteggio Neubauer	Assistente, Erlangen, Germania	Numero 40441
Pipette	Eppendorf AG, Amburgo, Germania	2231300004
Poli-L-lisina	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germania	P4707-50ML
Pipetta sierologica, 10 mL	Sarstedt, Nümbrecht, Germania	861254025
Pipetta sierologica, 25 mL	Sarstedt, Nümbrecht, Germania	861685001
Pipetta sierologica, 5 mL	Sarstedt, Nümbrecht, Germania	861253001
Piatto TC 60, cella +	Sarstedt, Nümbrecht, Germania	833901300
Microsfere Thy-1 (kit MACS)	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germania	Codice 130-094-523
Tripsina-EDTA (0,05%), rosso fenolo	Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Germania	Codice 25300-054
Collagenasi di tipo I	Sigma Aldrich GmbH, Steinheim, Germania	C1639
Bagnomaria tipo 1008	GFL, Burgwedel, Germania	Codice: 4285