Ottenere varie popolazioni di cellule neurali da un ippocampo di ratto

Abstract

Fonte: Schwarz, J. M. Utilizzo della selezione cellulare attivata dalla fluorescenza per esaminare l'espressione genica specifica del tipo di cellula nel tessuto cerebrale di ratto. J. Vis. Exp. (2015)

Questo video mostra un protocollo per isolare cellule da ippocampi di ratto, inclusi neuroni, astrociti e microglia.

Protocollo

Tutte le procedure che prevedono la raccolta dei campioni sono state eseguite in conformità con le linee guida IRB dell'istituto.

1. Raccolta dei tessuti

1. Preparare il tampone X dal kit di dissociazione neurale aggiungendo beta-mercaptoetanolo al tampone X fino a una concentrazione finale di 0,067 mM (per 4 campioni, aggiungere 13,5 μl di 50 mM di beta-mercaptoetanolo a 10 ml di tampone X).
2. Preparare la Miscela Enzimatica 1 mescolando 50 μl di Enzima P con 1.900 μl di Buffer X per ciascun campione, come descritto nel protocollo per il Neural Dissociation Kit. Ad esempio, per 4 campioni,....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Kit di dissociazione neurale (P)	Miltenyi Biotec	Codice 130-092-628
Perline per la rimozione della mielina II	Miltenyi Biotec	Codice 130-096-733
Colonne LS	Miltenyi Biotec	Codice 130-042-401
Separatore QuadroMACS	Miltenyi Biotec	Codice 130-090-976
MACS MultiStand	Miltenyi Biotec	Codice 130-042-303
Foglio di rete di nylon	amazzone	CMN-0074-10YD	40 pollici di larghezza, 80 micron di maglia
Blocco Fc / anti-CD32	BD Bioscienze	BDB550270	Reattività per il ratto
Anticorpo CD11b coniugato con APC	Bioleggenda	201809	Reattività per il ratto
Coniglio anti-GLT1	Novus Biologicals	NBP1-20136	Reattività per ratto o uomo
Anticorpo secondario anti-coniglio coniugato PE	eBioscience	1037259	Anticorpo secondario per anti-GLT1
Anticorpo di topo CD90 (Thy1) anti-ratto coniugato con FITC	Bioleggenda	202504	Reattività per il ratto