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Articolo metodologico
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8 luglio 2025
Fonte: Ackels, T., et al. Analisi fisiologica approfondita di popolazioni cellulari definite in fette di tessuto acuto dell'organo vomeronasale di topo. J. Vis. Exp. (2016)
Questo video descrive l'isolamento di un organo vomeronasale di topo (VNO) e la preparazione del tessuto per il sezionamento del vibratomo. Le sezioni vengono utilizzate per caratterizzare gli attributi biofisici e fisiologici di uno specifico gruppo di neuroni sensoriali.
Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
Sia i topi C57BL/6 che i topi Fpr-rs3-i-Venus sono stati alloggiati in gruppi di entrambi i sessi a temperatura ambiente su un ciclo luce/buio di 12 ore con cibo e acqua disponibili ad libitum. Per gli esperimenti, sono stati utilizzati giovani adulti (6-20 settimane) di entrambi i sessi. Non sono state osservate evidenti differenze dipendenti dal genere.
1. Preparazione della Soluzione
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Figura 1: Dissezione del VNO. (A) Vista laterale sulla testa del mouse per illustrare la posizione e l'angolo con cui vengono tagliati gli incisivi. (B) Vista ventrale che raffigura il punto migliore per afferrare e staccare il palato superiore (UP). (C) Vista ventrale sulla capsula cartilaginea (CC) che ospita il VNO e l'osso del vomere (VB) dopo a.......
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Agarosio (bassa temperatura gelificante) | PeqLab | 35-2030 | |
| ATP (Mg-ATP) | Sigma-Aldrich | Visualizzazione del materiale A9187 | |
| Acido bis(2-idrossietil)-2-amminoetansolfonico (BES) | Sigma-Aldrich | B9879 | |
| cloruro di calcio | Sigma-Aldrich | Visualizzazione del materiale C1016 | |
| Acido etilenglicole tetraacetico (EGTA) | Sigma-Aldrich | E3889 | |
| glucosio | Sigma-Aldrich | G8270 | |
| GTP (Na-GTP) | Sigma-Aldrich | Codice: 51120 | |
| Acido (2-idrossietil)-1-piperazineetansolfonico (HEPES) | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| cloruro di magnesio | Sigma-Aldrich | Codice: M8266 | |
| cloruro di potassio | Sigma-Aldrich | P9333 | |
| idrossido di potassio | Sigma-Aldrich | 3564 | |
| cloruro di sodio | Sigma-Aldrich | S7653 | |
| Carbonato acido di sodio | Sigma-Aldrich | Episodio 5761 | |
| idrossido di sodio | Sigma-Aldrich | S8045 | |
| Capsula di Petri grande, 90 mm | VWR | decapitazione, dissezione della capsula VNO | |
| Capsula di Petri piccola, 35 mm | VWR | coperchio per dissezione VNO, piatto per l'inclusione in agarosio | |
| Forbice chirurgica affilata di grandi dimensioni | Strumenti per la scienza | Decapitazione, rimozione della mascella inferiore | |
| Forbici per ossa forti | Strumenti per la scienza | taglio di incisivi | |
| Pinze medie, pinzette Dumont #2 | Strumenti per la scienza | rimozione della pelle e del palato | |
| Forbici a molla micro, 8,5 cm, curve, lame da 7 mm | Strumenti per la scienza | ritaglio VNO | |
| Due paia di pinze sottili, pinzette Dumont #5 | Strumenti per la scienza | dissezionamento di VNO dalla capsula cartilaginea | |
| Spatola piccola in acciaio inox | Strumenti per la scienza | Manipolazione di blocchi di agarosio e fette di tessuto | |
| Agitatore magnetico a piastra riscaldante | Snijders | Telefono 34532 | |
| Microforgia | Narishige | MF-830 | |
| Misuratore di pH cinque facile | Mettler Toledo | ||
| Barattolo per pipette | Strumenti di precisione mondiali | E212 | |
| Lamette | Wilkinson Sword GmbH | Spada Wilkinson Classica | |
| Camera di stoccaggio delle fette ossigenante; le camere commerciali alternative sono ad esempio BSK1 Brain Slice Keeper (Digitimer) o la precamera (BSC-PC; Warner Instruments) | Personalizzato | ||
| Stereomicroscopio | Leica Microsystems | S4E | |
| Vibratomo | Leica Microsystems | VT 1000 S | |
| Bagnomaria | Memmert | WNB 45 |
