Preparazione di fette di corteccia rinale-ippocampo da un cervello di cucciolo di ratto

Abstract

Fonte: Valente, C. A., et al., Un modello di epilettogenesi in colture di fette organotipiche della corteccia rinale-ippocampo. J. Vis. (2021)

Il video dimostra un metodo per ottenere fette di corteccia rinale-ippocampo dal cervello di un cucciolo di ratto e coltivarle in inserti membranosi all'interno di una piastra multi-pozzetto riempita con terreno per ulteriori analisi.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

1. Preparazione delle fette di corteccia rinale-ippocampo

NOTA: La preparazione delle fette di corteccia rinale-ippocampo utilizza ratti P6-7 Sprague-Dawley.

1. Impostazione della coltura e preparazione del terreno
   1. Il giorno prima della coltura, preparare il terreno necessario e posizionarlo a 4 °C.
   2. Preparare il terreno di dissezione: 25 mM di glucosio nella soluzione salina bilanciata (GBSS) di Gey.

Risultati

Figura 1: Procedura dettagliata per la preparazione di fette organotipiche della corteccia rinale-ippocampo. (A) Rimuovere il cervello dalla testa e metterlo in GBSS ghiacciato con la superficie dorsale rivolta verso l'alto. (B) Inserire la pinza nel cervelletto. Apri il cervello attraverso la linea mediana e rimuovi il tessuto in eccesso sopra l'ippocampo. (.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Lame per manico bisturi	Strumenti per la scienza	Codice 10011-00
Sistema a camera a fette di cervello/tessuto	Strumenti Warner
Inserti per colture cellulari, 30 mm, PTFE idrofilo	Millipore SAS	PICM03050
Incubatrice convenzionale	Thermo Scientific Heraeus	BB15, Linea funzione	Impostato a 37 °C e 5% di CO2
D(+)-Glucosio monoidrato	Merck Millipore	Codice 1.08342.1000
Soluzione di D-(+)-glucosio, 45% in acqua	sigma	G8769
di-Sodio idrogeno fosfato diidrato	Merck Milipore	Codice 1.06580.1000
Dumont #5 Fine Forceps Biologie Inox	Strumenti per la scienza	Codice 11254-20
Dumont #5 Pinze Standard Inox	Strumenti per la scienza	Codice 11251-20
Dumont #7 Pinze Standard Dumoxel	Strumenti per la scienza	Codice 11271-30
Dumont Medical #7S Pinza Curva Corta Inox	Strumenti per la scienza	Codice: 11273-22
Soluzione madre di gentamicina, 50 mg/mL	Thermo Fisher Scientifico	Codice 15750-037
salina bilanciata di Gey (GBSS)	Industrie Biologiche	01-919-1A
Elettrodi in vetro	Prodotti scientifici	GB150F-10	Punte rotonde fatte in casa
Pipette in vetro Pasteur, 230 mm	VWR Internazionale	612-1702
Siero di cavallo, inattivato a caldo (HS)	Thermo Fisher Scientifico	Codice 26050-088
Spatola a iride curva	Strumenti per la scienza	Codice 10092-12
Cabina di sicurezza biologica di classe II Labculture	HERASafe	HS 12
Soluzione di L-Glutammina 200 mM (Q)	Thermo Fisher Scientifico	Codice 25030-024
Neurobasale-A Medio (NBA)	Thermo Fisher Scientifico	Codice 10888-022
Opti-MEM® I Siero Ridotto Medium	Thermo Fisher Scientifico	Codice 31985-047
Platino 5 lame	Gillette
Carta da filtro qualitativa, cellulosa, grado 1, 55 mm	Whatman	1001-055	Ritenzione media 11μm
Carta da filtro qualitativa, cellulosa, grado 1, 90 mm	Whatman	Codice 1001-090	Ritenzione media 11μm
Manico del bisturi	Strumenti per la scienza	91003-12
Piastre sterili a 6 pozzetti trattate con TC	Corning	CORN3516
Regolatore di temperatura	SISTEMI MEDICI CORP.	TC-102
Trinciafazzoletti	Il Mickle Laboratory Engineering CO. LTD.	MTC/2	Impostato su 350 μm

Soluzione