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Articolo metodologico
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8 luglio 2025
Fonte: Engel, D. Registrazioni di patch-clamp subcellulari dal dominio somatodendritico dei neuroni della dopamina nigral. (2016).
Questo video mostra una tecnica per la registrazione patch-clamp dalla superficie della membrana dendritica. Questo aiuta a esaminare direttamente le proprietà elettriche dei dendriti e dei canali ionici voltaggio-dipendenti sottostanti nei neuroni dopaminergici.
Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Preparazione delle Soluzioni
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Tabella 1: Liquido cerebrospinale artificiale (ACSF)
| sostanza | g/mol | concentrazione | per 1 L |
| NaCl | 58.443 | 125 mM | 7.305 grammi |
| NaHCO3 | 84.007 | 25 mM | 2.100 g |
| Kcl | 74.551 | 2,5 m....... |
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Acqua a doppia distillazione | Millipore | Super Q | Resistività >14 MΩ cm, ideale 18,2 MΩ cm a 25°C, filtrato (0,22 μm), https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Super-Q-Plus-Water-Purification-System,MM_NF-C1760 |
| Candele con microfiltro | Robu | Porosità 3, 6 mm o 13 mm di diametro | |
| Affetta tessuti con vibrosonda | Leica | VT1200 | Parametri di taglio: velocità 0,07, ampiezza 1,40 |
| Affettatrice per tessuti | Dosaka | DTK-1000 | Parametri di taglio: Velocità 4, Frequenza 7 |
| Lamette | Gilette | Super Argento | |
| Strumenti di dissezione | Braun, Aesculap | ||
| Camera di riserva | Personalizzato | ||
| Beckers in PP | VWR | 213-1725 | Confezione da 400 ml |
| Filtro per siringa | Merk Millipore | Miglio - GV 0,22 μm | |
| Colla cianoacrilica | UHU | "Sekunden Kleber" | colla liquida |
| Camera di registrazione | Luigs & Neumann | Mini camera a fette | |
| Estrattore per pipette orizzontale | Strumenti Sutter | P-97 marrone-fiammeggiante | |
| Pipette | Hilgenberg | 1807524 | 2 mm o.d./1 mm i.d. capilari in vetro, estremità lucidate a fuoco, lavate |
| Cera dentale | Coltène/Whaledent | strisce di cera per vassoi ortodontici | |
| Griglia in platino | per ancorare le fette nella camera di registrazione, realizzata su misura con un disco di platino | ||
| Microforgia | Narishige | MF-830 | Per lucidare a fuoco i puntali delle pipette |
| Potassio metil solfato | MP Biomedicali | 215481 | |
| Biocitina | Sonde molecolari | B1592 | |
| manometro | GREISINGER elettronico | GDH 13 AN | |
| microscopio | Zeiss | Fs | |
| Contrasto sfumato Dodt | Luigs & Neumann | ||
| Manipolatori | Luigs & Neumann | LN Mini 25 | |
| Pinza per fotogrammi | La fonte di imaging | DFG/USB2pro | |
| macchina fotografica | DAGE-MTI | NC-70 | |
| condensatore | Zeiss | Condensatore ad alta apertura numerica funzionante con olio | |
| obiettivo | Zeiss | W Piano Apocromatico 441470-9900 VIS-IR | Obiettivo a immersione in acqua 1.0 con ingrandimento 63x, lunga distanza, apertura numerica elevata |
| Quadruplo cambio | Luigs & Neumann | tra la fotocamera e il microscopio | |
| Monitor video in bianco e nero | Sony | SSM-175CE | 16 pollici, 850 linee TV, analogico |
| Bottiglie campione, vetro ambrato, con tappo | VWR | Codice 215-2409 | per trasferire le fette dal setup alla sala istologica |
| La guida agli assoni | Dispositivi molecolari | libro | |
| Paraformaldeide | sigma | 441244 | vedere la SCHEDA DI SICUREZZA e la Direttiva sulle sostanze pericolose (UE) prima dell'uso |
| Piastra per coltura cellulare a pozzetti | Greiner-Bio-One | Codice 662160 | per la colorazione di fette fisse |
| Triton X-100 | Merk | 108643 | vedere la SCHEDA DI SICUREZZA e la Direttiva sulle sostanze pericolose (UE) prima dell'uso |
| ProLong Diamond Antifade | Sonde molecolari - Thermo Fisher Scientific | P36961 |
