Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
Sono stati utilizzati topi maschi knock-in PV-Cre, di 10-25 settimane. I topi sono stati alloggiati in condizioni standard nella struttura per animali e mantenuti in un ciclo di 12 luce/buio.
1. Preparazione di array di fili di tungsteno per registrazioni LFP
- Incollare una fibra ottica all'array di fili in modo che la punta della fibra sia al livello del filo più corto e la punta della fibra sia nelle immediate vicinanze, ma non tocchi i fili di tungsteno. Mantenere l'angolo della fibra il più piccolo possibile per evitare danni ai tessuti durante l'impianto.
2. Stimolazione optogenetica e acquisizione dati elettrofisiologici
- Controllare l'emissione luminosa dal cavo patch. Stimare l'emissione luminosa dalla punta della fibra dopo il collegamento in base alla velocità di trasmissione della fibra impiantata. Assicurarsi che l'emissione luminosa dalla punta della fibra sia compresa tra 5 e 15 mW per consentire un trascinamento affidabile.
- Collegare il preamplificatore dell'headstage al connettore impiantato cronicamente. Collegare il cavo patch in fibra ottica alla fibra ippocampale impiantata cronicamente per esperimenti di stimolazione optogenetica. Negli esperimenti di stimolazione della luce di controllo, la fibra ottica è collegata a una ghiera fittizia collegata all'auricolare.
- Posizionare il mouse nella camera di registrazione.
- Aprire il software per controllare il generatore di stimoli per generare il protocollo di stimolazione.
- Selezionare il canale che controlla il laser DPSS a 473 nm.
- Aprire il software del sistema di registrazione. Fare clic su "ACQ" per acquisire e su "REC" per registrare. Attendere prima dell'inizio della stimolazione luminosa per registrare il comportamento di base (ad esempio, 2 minuti per recuperare la velocità di base o 30 minuti per estrarre i campi di posizione di base).
- Aprire il software per controllare il generatore di stimoli. Fare clic su "File > Apri" e selezionare il file di protocollo desiderato. Fare clic su "Scarica e avvia" per avviare la stimolazione luminosa.
