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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Registrazione della risposta uditiva del tronco encefalico (ABR)
- Anestetizzare ratti Sprague Dawley (SD) (cuccioli di 1-14 giorni e adulti di 2 mesi, entrambi i sessi) con una singola iniezione di pentobarbital sodico all'1,5% (22 mg/kg per i cuccioli e 30 mg/kg per gli adulti, intraperitoneale (i.p.).
- Posizionare l'animale anestetizzato in uno stampo in polietilene espanso per immobilizzare il corpo dell'animale. Posizionare l'animale su un tavolo antivibrante in una stanza insonorizzante. Mantenere la temperatura corporea dell'animale a 37,5 °C con un termoforo.
- Pulire la zona della testa con etanolo al 70% (vol/vol). Utilizzando una forbice fine, praticare un'incisione di 1-2 mm ventrolaterale al padiglione auricolare esterno per posizionare l'elettrodo di riferimento o la rettifica. Un elettrodo ad ago sottocutaneo (elettrodo di registrazione) si trova sopra il vertice del cranio (Figura 1A).
- Utilizzando il generatore di funzioni, è possibile generare burst di tono calibrati (1 ms di salita/discesa, plateau di 3 ms) di varie frequenze (2, 4, 8, 16, 24 e 32 kHz) e intensità (diminuite da 85 a 10 dB SPL in incrementi di 5 dB). Varia la frequenza e l'ampiezza manualmente o utilizzando un computer. Eroga stimoli sonori attraverso un altoparlante elettrostatico situato a 10 cm di distanza verso la testa dell'animale.
- Filtra (100-1.000 Hz), amplifica e calcola la media (256 volte) del potenziale del suono suscitato utilizzando un processore multifunzione per ottenere gli ABR. Le tracce ABR vengono monitorate online e archiviate per l'analisi offline. Ci vogliono circa 40 minuti per completare la registrazione ABR da un animale.
nota: Di solito, è possibile identificare da tre a sette picchi (dall'onda I all'onda VII) con latenze inferiori a 15 ms (Figura 1B). La soglia ABR è definita come il livello sonoro minimo al quale le onde I e II possono essere rilevate.
- Soppressione prima che gli animali si sveglino dall'anestesia (con un'iniezione intraperitoneale di 0,3 ml di pentobarbital sodico all'1,5%).
