Monitoraggio della corteccia cerebrale con un array multi-elettrodo in risposta agli agenti che inducono le convulsioni

Abstract

Fonte: Lu, H. C., et al. Stimolazione a corrente continua e registrazione di array multi-elettrodo dell'attività simile a una crisi nella preparazione di fette di cervello di topi. J. Vis. Exp. (2016).

In questo video, vengono studiati gli effetti della stimolazione transcranica a corrente continua (tDCS) su fette di cervello contenenti le regioni della corteccia cingolata anteriore (ACC) e del talamo, utilizzando un array multi-elettrodo (MEA) per misurare i segnali elettrici. Erogando impulsi elettrici e infondendo farmaci che inducono convulsioni, lo studio indaga la risposta dell'ACC alle convulsioni.

Protocol

Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

1. Preparazione della Soluzione Sperimentale e dell'Attrezzatura per la Registrazione MEA (Multielectrode Array)

1. Preparare il liquido cerebrospinale artificiale (aCSF; 124 mM NaCl, 4,4 mM KCl, 1 mM NaH₂PO₃, 2 mM MgSO₄, 2 mM CaCl₂, 25 mM NaHCO₃ e 10 mM di glucosio, bollato con il 95% di O₂ e il 5% di CO₂).
2. Utilizzare due tipi di sonde MEA: 6 x 10 MEA planari e 8 x 8 MEA. La prima son....

Results

Figura 1: Preparazione della fetta di talamocingulato e configurazione del sistema di registrazione MEA. (a) Procedura di taglio MT-ACC (a) Rimuovere il cervello e (b) trasferire in aCSF ossigenato freddo. (c) Eseguire due tagli parasagittali dalla linea mediana. (d) Vista laterale della parte mediale del blocco cerebrale. (e) Eseguire due tagli ventrali angolati del blocco cerebrale. (f) Incollare i.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflurano	Società di prodotti Halocarbon	NDC 12164-002-25	4%
aCSF (totale: 1 L):
D(+)-glucosio	Merck	Codice 1.08337.1000	10 mM
Carbonato acido di sodio	Merck	Codice 1.06329.0500	25 mM
cloruro di sodio	Merck	Codice 1.06404.1000	124 mM
(+)-L-ascorbato di sodio, >=98%	sigma	A4034-100G	0,15 g/2 c.c
Solfato di magnesio, anidro, ReagentPlus	sigma	Codice: M7506-500G	2 mM
Cloruro di calcio diidrato	Merck	Codice 1.02382.1000	2 mM
Sodio diidrogeno fosfato monoidrato	Merck	Codice 1.06346.1000	1 mM
cloruro di potassio	May & Baker LTD, Dagenham, Inghilterra	MS 7616	4,4 mM
(+)-Bicucullina	TOCRI	130	5 μM in aCSF
4-amminopiridina	TOCRI	940	250 μM in aCSF
Vibratomo	Vibratomo	Serie 1000	Taglio a blocchi in fette spesse 500 μm
Sonde multielettrodo (MEA): 6 x 10 MEA planari	Sistemi multicanale	60MEA500/30iR-Ti-pr MEAS 6x10	diametro dell'elettrodo, 30 μm; distanza tra gli elettrodi, 500 μm; impedenza, 50 kΩ a 200 Hz
Sonde multielettrodo (MEA): 8 x 8 MEA	Ayanda Biosystems	60MEA200/10iR-Ti-pr MEAS 8x8	elettrodo di forma piramidale; diametro, 40 μm; altezza della punta, 50 μm; distanza tra gli elettrodi, 200 μm; impedenza, 1.000 kΩ a 200 Hz
È stato utilizzato un amplificatore a 60 canali con un filtro passa-banda impostato tra 0,1 Hz e 3 KHz a 1.200X di amplificazione	Sistemi multicanale	MEA-1060-BC
Software MC Rack a una frequenza di campionamento di 10 KHz	Sistemi multicanale		Software per la raccolta e la registrazione dei dati
Controllo di un generatore di impulsi	Sistemi multicanale	STG 1002
Kit di ancoraggio e fermi per fette	Strumenti Warner	SHD-26H/10; WI64-0250
Pompa peristaltica-minipuls3	Gilsom	MINIPULS3	Velocità di perfusione : 8 ml/min
Stimolatore isolato	Sistemi A-M	Modello 2100	intensità di ±350 μA , durata di 200 μsec
Elettrodo di tungsteno	Sistemi A-M	Codice: 575300	collocato nel talamo