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Articolo metodologico

Visualizzazione e mappatura dei percorsi neuronali in una fetta di cervello dell'amigdala

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8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

Fonte: Bosch, D., et al. Dissezione optogenetica ex vivo dei circuiti di paura nelle fette di cervello. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video mostra una procedura per analizzare la connettività sinaptica tra la corteccia prefrontale mediale (mPFC) e i neuroni dell'amigdala utilizzando fette di cervello acuto dell'amigdala da topi. I neuroni mPFC in questi topi esprimono la canalrodopsina fusa con una proteina fluorescente. Le canalrodopsine facilitano l'afflusso di ioni e la generazione di potenziale d'azione nei neuroni mPFC dopo l'attivazione della luce. Di conseguenza, i neuroni mPFC rilasciano neurotrasmettitori che si legano ai neuroni postsinaptici dell'amigdala, innescando correnti postsinaptiche che vengono registrate per visualizzare la connettività mPFC-amigdala.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

1. Visualizzazione e stimolazione delle fibre presinaptiche

  1. Preparare il microscopio patch per l'attivazione optogenetica di fibre e cellule:
    1. Centrare il diodo a emissione luminosa (LED) montato sul percorso di erogazione della luce.
    2. Misurare l'intensità della luce LED sul piano focale posteriore e all'uscita di ciascun obiettivo con un misuratore di potenza scegliendo la lunghezza d'onda appropriata di 470 nm.
    3. Calcola l'intensità del....

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Risultati

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Figura 1. Iniezioni stereotassiche, preparazione di fette cerebrali acute e visualizzazione delle fibre presinaptiche. (A, B) Iniezione stereotassica di virus. A) Immagine di topo anestetizzato posizionato in una cornice stereotassica con il cranio esposto e la pipetta per iniezione. Riquadro: Ingrandisci l'immagine della pipetta per iniezione riempita con soluzione virale mescolata .......

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Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Liquido cerebrospinale artificiale (ACSF)Per la composizione vedi riferimenti #16 e #23
Soluzioni patch internePer la composizione vedi riferimenti #16 e #23
MagnesioSolfato EptaidratoRoth, GermaniaP027.1preparare la soluzione madre 2M in acqua purificata
Stereoscopio, SZX2-RFA16Olimpo, Giappone
Lampada fluorescente Xcite (XI120Q-1492)Lumen Dynamics Group, CanadaCodice: 2012-12699
Microscopio patch, BX51WIOlimpo, Giappone
Amplificatore patch Multiclamp 700BMolecular Devices, Stati Uniti
Digitdata 1440AMolecular Devices, Stati Uniti
Software PClamp, versione 10Molecular Devices, Stati UnitiUtilizzato per controllare l'acquisizione e la stimolazione dei dati
Regolatore di temperatura del bagno, TC05Luigs & Neumann, Germania200-100 500 0145
Micromanipolatore a tre assi Mini 25Luigs & Neumann, Germania210-100 000 0010
Controllore per micromanipolatore SM7Luigs & Neumann, Germania200-100 900 7311
Capillari in vetro per pipette per cerottiWorld Precision Instruments, GermaniaGB150F-8P
Carta da filtro in nitrato di cellulosa per camera di interfacciaSatorius Stedim Biotech, Germania13006--50----ACN
Unità LED, CoolLED pECoolLED, Regno Unito244-1400CoolLED o USL 70/470 e gli adattatori appropriati sono due scelte alternative per la stimolazione LED
CoolLED 100 Dual AdaptCoolLED, Regno UnitopE-ADAPTOR-50E
Unità LED, USL 70/470Rapp OptoelettronicoL70-000
Adattatore a doppia portaRapp OptoelettronicoInformarsi con l'azienda
Set di filtri rosso (eccitazione)AHF, GermaniaF49-560I filtri possono essere acquistati come set F46-008
(divisore di fascio)AHF, GermaniaF48-585
(emissione)AHF, GermaniaF47-630
Set di filtri verde (eccitazione)AHF, GermaniaF39-472In alternativa: set di filtri F36-149 o F46-002 (con emissione passa-banda)
(divisore di fascio)AHF, GermaniaF43-495W
(emissione)AHF, GermaniaF76-490
LaserCheck, misuratore di potenza portatileCoherent, Stati Uniti1098293
Software IgorPro, versione 6Wavemetrics, Stati UnitiPer l'analisi dei dati elettrofisiologici, è possibile utilizzare anche altri pacchetti software alternativi
Suite neuromatica di macro per IgorProhttp://www.neuromatic.thinkrandom.com

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