Una tecnica di iniezione di soluzione salina ipertonica per indurre il glaucoma nei ratti

Abstract

Fonte: Gossman, C. A. et al. Procedura che induce il glaucoma in un modello di ratto in vivo e preparazione della retina a montaggio intero. J. Vis. Exp. (2016)

Questo video dimostra l'induzione del glaucoma in un ratto anestetizzato iniettando soluzione salina ipertonica nella vena episclerale. La soluzione salina entra nella rete trabecolare attraverso il canale di Schlemm, causando cicatrici tissutali, che bloccano il deflusso dell'umore acqueo e aumentano la pressione intraoculare. L'elevata pressione danneggia le cellule gangliari retiniche, portando al glaucoma.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Animali

1. Utilizzare ratti maschi e femmine di 3 mesi di età in questo studio.
2. Mantieni gli animali in un ciclo luce/buio di 12 ore con libero accesso a cibo e acqua.

2. Preparazione del cocktail KAX (ketamina + xilazina + acepromazina) per anestesia animale

1. Sciogliere 50 mg di xilazina (20 mg/ml) in 5 ml di ketamina (100 mg/ml) con 1 ml di acepromazina (10 mg/ml)....

Risultati

Figura 1. Componenti di microaghi. (A)Siringa con tubo in polietilene utilizzata per l'iniezione di soluzione fisiologica. (B) Siringa di riempimento utilizzata per riempire il microago in borosilicato. (C) Estrattore per elettrodi in narishige utilizzato per realizzare microaghi in borosilicato. (D) Elettrodi in vetro borosilicato prima e dopo esser.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Xilazina cloridrato, minimo 99%	Sigma, Scienze della Vita	X1251-1G
Iniezione di ketamina cloridrato, USP, 100mg/ml	Putney, Inc	NDC 26637-411-01	Flacone da 10 ml
Acepromazina maleato, 10mg/ml	Phoenix Pharmaceutical, Inc	NDC 57319-447-04, 670008L-03-0408	Flacone da 50 ml
Flacone di siero, 10 ml	VWR	16171319	Vetro borosilicato
Siringa da insulina da 1 ml	VWR	BD329410	Ferri da 28 g
cloruro di sodio	sigma	S7653	Soluzione 2 M
Estrattore per microelettrodi	Gruppo Narishige	PP-830
Tubi in borosilicato standard e a parete sottile lucidati pesanti	Strumenti Sutter	B150-86-10HP	senza filamento, 0,86 mm
Ago per siringa Microfil per il riempimento di micropipette	Strumenti di precisione mondiali, Inc	MF28G
Ago Luer-Lock calibro 18	Fisher Scientifico	1130421	Ago per siringa
Tubi flessibili in polietilene	Fisher Scientifico	22046941	0,034 pollici di diametro, circa 10 pollici
Soluzione oftalmica di proparacaina cloridrato, USP, 0,5%	Akorn, Inc	NDC 17478-263-12	Flacone sterile da 15 ml
microscopio	Leica	Zoom stereo 4
Morsetto emostatico	Strumenti per la scienza	1310912	bordo curvo
Unguento antibiotico triplo	Fisher Scientifico	NC0664481
Manico del bisturi	Strumenti per la scienza	Codice 10004-13
Lama per bisturi #11	Strumenti per la scienza	Codice 10011-00
Piastra Petri monouso da 60 mm x 15 mm	VWR	351007
Soluzione salina tamponata con fosfato 10x concentrato	Sigma, Scienze della Vita	P7059-1L	1x diluizione
Forbici a molla	Strumenti per la scienza	Codice 15009-08
Pinze (2), Dumont # 5	Strumenti per la scienza	Codice 11251-30
Sylgard 184	VWR	Codice 102092-312