Neuropatologia

Per rilevare l'atrofia cerebrale, iniziare con vetrini che trasportano le sezioni cerebrali deparaffinizzate da modelli murini neurodegenerativi a varie età.

Per visualizzare queste NP, prendete una sezione di cervello umano deparaffinizzata e fissa.

Aggiungere acqua distillata doppia per lavare le sezioni.

Trattare il tessuto con tetrossido di osmio per stabilizzare le strutture cellulari, compresa la lipofuscina.

Omogeneizzare il tessuto per rilasciare le proteine nel tampone. Gli inibitori della proteasi bloccano l'attività della proteasi, impedendo la degradazione delle proteine.

Aggiungere un tampone di caricamento contenente un detergente, un agente riducente e un colorante tracciante.

Incubare con un enzima proteolitico per digerire i prioni normali, lasciando intatti gli aggregati resistenti.

Incubare con una soluzione di perossido di idrogeno per inibire le perossidasi endogene e prevenire la colorazione aspecifica.

Queste sezioni contengono grovigli neurofibrillari, aggregati anormali di proteina tau che si trovano all'interno dei neuroni dell'ippocampo.

Per visualizzare l'eparan solfato, iniziare con una sezione di tessuto ippocampale umano malato contenente placche amiloidi.

Centrifugare il campione in pellet di detriti cellulari e raccogliere il surnatante.

Questo protocollo delinea l'estrazione di proteine dalle cellule tumorali neuronali. Le cellule vengono lavate con un tampone e lisate tramite disgregazione enzimatica e meccanica. Il surnatante ricco di proteine estratto viene raccolto dopo la centrifugazione.

Questo video mostra la procedura per colorare in modo fluorescente i neuroni corticali di ratto per la microscopia. Si rivolge alla F-actina e alle proteine dendritiche per analizzare l'integrità strutturale e calcolare la densità della F-actina, che è fondamentale per studiare la funzione e la salute neuronale.

Questo video mostra il protocollo per isolare le fibrille amiloidi dall'estratto di tessuto cerebrale di topo utilizzando la centrifugazione in gradiente di densità e la digestione di proteine non amiloidi.

Questo video delinea la generazione di un modello di lesione neuronale utilizzando specie reattive dell'ossigeno (ROS) nei neuroni primari dei granuli cerebellari di topo. Descrive in dettaglio il processo di induzione dello stress ossidativo aggiungendo alte concentrazioni di perossido di idrogeno. L'esposizione ai ROS provoca rotture del filamento di DNA e instabilità genomica. Inoltre, l'ossidazione delle proteine cellulari ne compromette le funzioni, mentre la perossidazione lipidica...

Questo video dimostra un metodo per valutare gli effetti neurotossici delle nanoparticelle utilizzando la microglia. Delinea i passaggi per l'attivazione della microglia con nanoparticelle, il filtraggio dei mezzi condizionati per isolare le citochine pro-infiammatorie derivate dalla microglia e il test della tossicità dei neuroni ipotalamici con i mezzi condizionati.

Il video dimostra l'induzione della neurodegenerazione nei nervi segmentali della larva di Drosophila attraverso una lesione meccanica. La cuticola ventrale delle larve anestetizzate viene pizzicata con una pinza per causare lesioni ai nervi segmentali. Le larve ferite vengono mantenute con il cibo, consentendo alla lesione di causare la degenerazione dei motoneuroni nei nervi, causando l'interruzione delle loro giunzioni neuromuscolari (NMJ).

Questo video mostra una procedura per creare un modello di ratto del morbo di Parkinson iniettando la neurotossina 6-idrossidopamina (6-OHDA) nel cervello. L'infusione di neurotossina nel fascio mediale del proencefalo (MFB) colpisce specificamente i neuroni dopaminergici responsabili del controllo motorio, portando alla loro distruzione e replicando i sintomi della malattia di Parkinson.

In questo video, viene dimostrato un protocollo graduale per le cellule staminali embrionali umane in organoidi neurali. Il metodo prevede l'induzione della formazione di rosette neuronali, seguita da una maturazione controllata e dalla coltura finale su una membrana idrofobica per ottenere organoidi neurali completamente sviluppati.

Questo video dimostra la differenziazione delle cellule staminali embrionali umane (hESC) in neuroni dopaminergici, per fornire un modello per lo studio del morbo di Parkinson. Le hESC vengono coltivate in un mezzo di induzione neurale in una piastra a micropozzetti per formare neurosfere 3D. Questi vengono poi coltivati in un mezzo di induzione neurale per promuovere la differenziazione in neuroni progenitori dopaminergici. La maturazione finale dei neuroni avviene in un inserto di coltura in...

Questo video dimostra una valutazione in vitro del collasso del cono di crescita neuronale da parte di aggregati di amiloide-β (Aβ). Il trattamento dei neuroni con aggregati Aβ provoca la destabilizzazione del citoscheletro, portando al collasso dei coni di crescita sulla punta degli assoni. Le cellule trattate vengono confrontate con le cellule di controllo per valutare l'entità del collasso del cono di crescita.

Il video mostra una procedura per preparare fette di cervello corticale umano da pazienti con malattia di Alzheimer per analizzare la deposizione di peptidi amiloide-beta (Aβ) utilizzando la spettrometria di massa per immagini a desorbimento/ionizzazione laser assistita da matrice (MALDI-IMS). Le fasi includono la preparazione dei vetrini, il trattamento del tessuto per migliorare la ionizzazione e l'analisi della distribuzione spaziale dei peptidi beta-amiloide.

Questo video dimostra l'immunocolorazione dei neuroni trattati con aggregati di alfa-sinucleina (αS). I neuroni vengono prima trattati con aggregati αS. Vengono quindi fissati, permeabilizzati e trattati con una soluzione bloccante. Vengono aggiunti gli anticorpi primari, seguiti da un anticorpo secondario marcato in fluorescenza e da una colorazione nucleare. Il campione viene quindi montato e osservato al microscopio.

Questo video mostra una procedura per indurre la degenerazione retinica in zebrafish adulti utilizzando lesioni laser. Il laser prende di mira le cellule fotorecettrici della retina, innescando la morte cellulare e un processo degenerativo. Questo danno attiva le cellule della glia di Müller (MG), portando alla loro dedifferenziazione in progenitori di cellule staminali che aiutano nella rigenerazione retinica.

Questo video dimostra la procedura di iniezione di peptidi amiloidi monomerici nel proencefalo di zebrafish adulto per generare tossicità amiloide, imitando il danno neuronale osservato nella malattia di...

Questo video dimostra il protocollo per misurare l'attivazione del recettore degli odori nelle cellule trasfettate utilizzando un biosensore di adenosina monofosfato ciclico (cAMP) e il rilevamento della luminescenza. Il metodo viene applicato per studiare le interazioni recettore-ligando e le vie di segnalazione nei neuroni olfattivi.

Questo video dimostra la procedura per iniettare peptidi amiloide-beta, cloruro di alluminio e un fattore di crescita neuroinfiammatorio, che collettivamente aiuta nella formazione di placche amiloidi tossiche nella regione dell'ippocampo. Ciò provoca una compromissione della memoria nel ratto, caratteristica del morbo di Alzheimer.

Questo video dimostra la precisa infusione stereotassica di beta amiloide nel giro dentato per stabilire un modello murino della malattia di Alzheimer. L'accurata determinazione delle coordinate e la somministrazione controllata delle proteine beta-amiloidi provocano la degradazione neuronale, interrompendo l'elaborazione della memoria e contribuendo allo sviluppo della malattia di Alzheimer.

Questo video dimostra l'iniezione di fibrille di alfa-sinucleina in un topo per indurre la neuroinfiammazione. Le fibrille vengono iniettate per via intraperitoneale in un topo transgenico che esprime proteine alfa-sinucleina mutate. Una volta raggiunto il sistema nervoso centrale, le fibrille entrano nei neuroni e inducono l'aggregazione delle proteine mutate. Gli aggregati si diffondono ai neuroni vicini, alle microglia e agli astrociti. Il riconoscimento degli aggregati innesca la microglia...

Questo video mostra la procedura per l'imaging in vivo di C. elegans che esprime proteine simili ai prioni marcate con proteina fluorescente rossa. Il protocollo prevede l'immobilizzazione dei nematodi su un tampone di agarosio per la microscopia confocale time-lapse, rivelando l'aggregazione e il trasporto delle proteine all'interno e tra le cellule. Questa tecnica è fondamentale per studiare l'aggregazione proteica correlata alle malattie neurodegenerative.

Questo video dimostra il processo di iniezione di un vettore virale nel ratto substantia nigra per modellare il morbo di Parkinson. Delinea le fasi per la preparazione del ratto, la microiniezione del vettore virale nella substantia nigra e la procedura di recupero.

Questo video spiega il processo di isolamento e arricchimento di aggregati proteici insolubili come detergenti da tessuto cerebrale umano congelato post mortem. Illustra i passaggi chiave, tra cui l'omogeneizzazione, il trattamento con detergenti, la sonicazione e l'ultracentrifugazione per separare e purificare gli aggregati insolubili. La fase finale prevede la solubilizzazione degli aggregati in tampone ureico per ulteriori analisi.

Questo video dimostra l'imaging e la quantificazione di aggregati proteici in cervelli di Drosophila geneticamente modificati. I cervelli vengono fissati, lavati e trattati con un agente antisbiadimento prima del montaggio. Le immagini vengono acquisite utilizzando un microscopio confocale e quantificate per osservare la trasmissione di aggregati proteici mutanti.

Questo video dimostra un protocollo per studiare la co-localizzazione dei recettori dell'orexina e dei cannabinoidi nel tessuto cerebrale adulto di pesce zebra adulto normale e indotto dalla dieta (DIO) utilizzando l'immunofluorescenza.

Questo video dimostra il processo di quantificazione dell'accumulo di alfa-sinucleina nei neuroni dopaminergici embrionali di topo pre-trattati con fibrille preformate di alfa-sinucleina. Descrive i passaggi per fissare, colorare e quantificare i neuroni dopaminergici contenenti aggregati di alfa-sinucleina utilizzando l'immunofluorescenza.

Questo video dimostra come misurare l'attività del proteasoma in diversi compartimenti subcellulari dell'amigdala laterale da cervelli di ratto condizionati dalla paura e di controllo utilizzando un test del peptide fluorogenico. Il proteasoma scinde il substrato peptidico fluorogenico, rilasciando molecole fluorescenti, che vengono quantificate utilizzando un lettore di piastre per valutare l'attività del proteasoma nelle frazioni proteiche nucleari e sinaptiche. L'aumento dell'attività...

Questo video dimostra il processo di induzione delle discinesie indotte da levodopa in un modello di ratto Parkinson somministrando levodopa insieme a un inibitore della conversione della dopamina. Le iniezioni ripetute sovrastimolano i neuroni cerebrali, con conseguente disfunzione motoria.

Questo video dimostra l'induzione del dolore neuropatico orofacciale in un modello di ratto mediante legatura del nervo infraorbitale. Ciò si traduce in danni ai nervi e infiammazione, causando una segnalazione anomala del dolore e imitando le condizioni di dolore cronico, che possono essere utilizzate per studiare il test del dolore orofacciale.

Questo video mostra il metodo per rilevare i neuroni che invecchiano nelle sezioni corticali degli organoidi mediante colorazione per l'attività della beta-galattosidasi, che è elevata nelle cellule senescenti. L'enzima scinde un substrato per produrre un prodotto blu, seguito dall'osservazione microscopica dei neuroni colorati.

Questo video mostra la generazione di un modello murino di demielinizzazione focale utilizzando un'iniezione di lisofosfatidilcolina (LPC) a due punti. Il cranio di un topo anestetizzato è esposto. Vengono determinate le coordinate di iniezione e viene praticato un foro per consentire le iniezioni di LPC in siti mirati. L'LPC induce la demielinizzazione focale dei neuroni attraverso l'infiammazione, mentre un'iniezione a due punti ne garantisce la sostenibilità.

Questo video mostra il processo di visualizzazione di un interneurone pieno di biocitina in una sezione ippocampale di ratto, evidenziando la sua identità neurochimica attraverso l'uso di anticorpi specifici e la microscopia a fluorescenza.

Questo video mostra la colorazione immunoistochimica della proteina S-100 nelle sezioni di biopsia per aspirazione rettale. Le sezioni recuperate dall'antigene vengono bloccate e trattate con anticorpi primari, seguiti da anticorpi secondari contro S-100, un marcatore della malattia di Hirschsprung. Il substrato cromogenico viene aggiunto per colorare le cellule bersaglio. I campioni vengono disidratati e montati prima di essere visualizzati al microscopio.

Questo video mostra il metodo per indurre la demielinizzazione nei neuroni del midollo spinale di topo utilizzando iniezioni di lisolecitina, seguita dalla rimielinizzazione attraverso la migrazione e la differenziazione delle cellule precursori degli oligodendrociti. Il processo compromette e quindi ripristina gradualmente la trasmissione del segnale neuronale.

Questo video mostra il processo di trasduzione di cellule neuronali umane con un lentivirus che codifica per una proteina tau umana mutante marcata con proteina fluorescente gialla (YFP) per studiare l'aggregazione proteica. Delinea i passaggi dall'ingresso virale all'espressione della tau mutante, culminando nella formazione di aggregati tau citoplasmatici visibili nei neuroni.

Questo video mostra la marcatura delle cellule neuronali con anticorpi per i complessi della catena respiratoria mitocondriale, la proteina associata al DNA mitocondriale e la proteina della membrana esterna mitocondriale, seguita da citometria a flusso per quantificarne i livelli.

Questo video mostra la procedura di misurazione dell'attività della γ-secretasi in cellule umane geneticamente modificate utilizzando un sistema inducibile da tetraciclina. Il processo prevede l'induzione dell'espressione genica di APP con tetraciclina, la generazione di peptidi amiloidi-β e l'attivazione della produzione di luciferasi. Viene quindi misurata la bioluminescenza risultante dalla reazione luciferasi-substrato, che riflette l'attività della γ-secretasi.

Questo protocollo delinea l'uso dell'immunoistochimica per identificare le regioni del locus coeruleus nelle sezioni del cervello del topo. Prendendo di mira la dopamina β-idrossilasi con anticorpi marcati con fluoroforo verde, i neuroni produttori di noradrenalina vengono visualizzati al microscopio come fluorescenza verde.

Il video mostra il processo di utilizzo di una sonda di microdialisi per raccogliere proteine extracellulari dal liquido interstiziale (ISF) del cervello di un topo. Una sonda per microdialisi, dotata di una membrana semipermeabile cut-off ad alto peso molecolare, viene inserita nel cervello di un topo anestetizzato tramite una cannula guida impiantata. La sonda, collegata a pompe, consente a un tampone fisiologico di perfondere il tessuto cerebrale e mescolarsi con l'ISF. Le proteine nell'ISF...

Questo video dimostra il metodo per indurre lo stress cronico in un topo attraverso l'immobilizzazione ripetuta, che porta al rilascio di corticosterone e alla riduzione dell'attività del recettore del glutammato nei neuroni, che si traduce in un comportamento simile alla depressione.

Questo video mostra la procedura per preparare e trattare gli emislici cerebrali di ratto con un peptide neurotossico per imitare la neurodegenerazione. Il protocollo consente di analizzare gli eventi neurodegenerativi confrontando direttamente le fette di controllo e trattate sullo stesso piano anatomico.

Questo video dimostra l'uso di cellule gangliari della radice dorsale trasfettate per studiare il rilascio di neurotrasmettitori stimolandole con un agonista del recettore dei neuropeptidi.

Questo video dimostra la colorazione immunoistochimica delle fibre colinergiche nel nucleo basale della regione di Meynert delle sezioni cerebrali di topo. Le sezioni vengono bloccate e trattate con anticorpi primari contro la colina acetiltransferasi, seguiti da anticorpi secondari biotinilati. Vengono aggiunti complessi avidina-biotina-perossidasi, che si legano agli anticorpi secondari, seguiti dal substrato cromogenico. Le sezioni vengono quindi disidratate e montate prima di essere...

Questo video dimostra la valutazione dell'assorbimento della dopamina nei sinaptosomi raccolti dal cervello di topo. Delinea i passaggi per preparare i sinaptosomi per l'assorbimento della dopamina tramite trasportatori della dopamina, trattandoli con concentrazioni variabili di dopamina radiomarcata, isolando i sinaptosomi e misurando la radioattività per quantificare l'assorbimento della dopamina.

Questo video mostra la procedura per colorare fette fisse di cervello di ratto contenenti interneuroni pieni di biocitina. Il protocollo include l'incubazione con il complesso avidina-biotina (ABC), la colorazione con HRP e substrato cromogenico, la conservazione delle strutture con tetrossido di osmio e l'inclusione del tessuto nella resina per l'imaging.

Questo video mostra il rilevamento della sintesi dell'RNA del recettore della serotonina utilizzando sonde oligonucleotidiche nel tessuto cerebrale di ratto affetto da sindrome serotoninergica. Il protocollo include il pretrattamento tissutale, l'ibridazione della sonda e il rilevamento enzimatico per visualizzare e quantificare l'espressione dell'RNA del recettore della serotonina al microscopio.

In questo video, una fetta di cervello cerebellare di topo è stata utilizzata per studiare le interazioni sinaptiche tra fibre parallele, fibre rampicanti e cellule di Purkinje, che sono essenziali per il controllo motorio. La stimolazione delle fibre rampicanti ha indotto depressione a lungo termine (LTD) nelle cellule di Purkinje, indebolendo la forza sinaptica e determinando una ridotta risposta alla stimolazione delle fibre parallele.

Questo video mostra la colorazione in immunofluorescenza di un cervello di Drosophila transgenico per l'imaging di cellule gliali su singola cellula. Il cervello esprime proteine mirate alla membrana fuse con diverse combinazioni di epitopi antigenici sotto il controllo di un sistema ricombinasi gliale-specifico. I cervelli isolati e fissati vengono colorati con anticorpi primari specifici per gli epitopi antigenici, seguiti da anticorpi secondari coniugati con fluorofori. Questa etichettatura...

Questo video mostra una procedura chirurgica stereotassicamente guidata per l'ablazione della corteccia uditiva in un ratto. I passaggi includono l'identificazione dei punti di riferimento anatomici in un ratto anestetizzato fissato in una cornice stereotassica, la creazione di una finestra sul cranio sopra la corteccia uditiva, l'aspirazione degli strati corticali e la fornitura di cure post-operatorie per valutare l'impatto dell'ablazione sull'elaborazione del suono.

In questo video, descriviamo la procedura per eseguire la colorazione a fluorescenza utilizzando la microscopia a fluorescenza per dimostrare la colorazione della falloidina delle cellule della cresta neurale coltivate su idrogel di rigidità variabile per visualizzare e analizzare l'organizzazione del citoscheletro.

Questo video mostra la reticolazione delle proteine della superficie neuronale utilizzando il suberato di bis-sulfosuccinimidil o BS3. Il cervello di topo isolato e raffreddato viene sezionato coronalmente. La regione desiderata viene estratta dalle sezioni, tritata e trattata con BS3. BS3 lega le proteine di superficie come i recettori GABA, lasciando inalterate le proteine interne. La reazione viene spenta con glicina prima di elaborare i campioni per ulteriori analisi.

Il video mostra una tecnica per misurare l'assorbimento del glucosio nei motoneuroni larvali di Drosophila utilizzando un sensore di glucosio intracellulare basato sul trasferimento di energia per risonanza di fluorescenza (FRET). Dopo aver sezionato le larve per esporre il cordone nervoso ventrale, i motoneuroni vengono visualizzati attraverso la fluorescenza emessa dal fluoroforo donatore del sensore. Quando stimolato con glucosio, il FRET tra i fluorofori donatore e accettore del sensore...

Questo video mostra la procedura per l'immunocolorazione di una sezione fissa di tessuto cerebrale di topo con astrociti marcati in fluorescenza utilizzando anticorpi primari e secondari e cattura le immagini degli astrociti colorati attraverso la microscopia confocale.

Questo video mostra come isolare le cellule di Purkinje da un tessuto cerebellare umano post-mortem utilizzando la microdissezione a cattura laser.

Questo video mostra un protocollo dettagliato passo dopo passo per la preparazione di sezioni di tessuto cerebrale di topo congelate per le analisi a valle.

Questo video dimostra lo sviluppo di un modello di coltura d'organo pro-infiammatorio e degenerativo per la malattia del disco intervertebrale (IVD) in stadio iniziale utilizzando il TNF-α. Delinea la procedura per iniettare il TNF-α nel disco intervertebrale e spiega i meccanismi attraverso i quali il TNF-α induce l'infiammazione e la degradazione dell'IVD.

Questo video mostra la dissociazione del tessuto cerebrale di ratto congelato in una sospensione a singola cellula utilizzando la digestione enzimatica e la triturazione meccanica. Le cellule preparate vengono fissate e permeabilizzate con etanolo per applicazioni a valle come la citometria a flusso o l'analisi dell'espressione genica.

Il video mostra l'analisi dello stato di palmitoilazione delle proteine della membrana cellulare isolate dal tessuto cerebrale di topo. Il processo prevede l'esposizione delle cisteine non palmitoilate e il loro blocco, quindi l'utilizzo di un polimero che si lega alle cisteine palmitoilate, aiutando a valutare lo stato di palmitoilazione delle proteine isolate.

Questo video mostra un metodo per fabbricare microsfere polimeriche che incapsulano cellule neurotossiche secernenti amiloide-beta. La sospensione cellula-polimero viene lavorata attraverso un dispositivo di fabbricazione di microsfere, con gelificazione del polimero ottenuta tramite reticolazione del calcio, formando microsfere sferiche attorno alle cellule. Il polimero consente la proliferazione cellulare consentendo un rilascio controllato e a lungo termine di amiloide-beta, simulando il suo...

Il video mostra una procedura passo-passo per sezionare simmetricamente un cervello umano post-mortem fisso, preparando blocchi di tessuto più piccoli per ulteriori analisi.

Questo video mostra la procedura per valutare la capacità di ritenzione del calcio nei mitocondri monitorando in tempo reale i cambiamenti nella fluorescenza quando i mitocondri assorbono il calcio. Questo test è utile per studiare la funzione mitocondriale e i processi correlati al calcio, tra cui l'apoptosi e le malattie neurodegenerative.

Questo video mostra l'effetto dell'infusione continua di farmaci nel cervello del topo sui livelli di glucosio nel sangue. Il metabolismo del glucosio viene valutato prelevando il sangue dalla coda di un topo a digiuno e misurando i livelli di glucosio prima e dopo la somministrazione orale di glucosio. La tolleranza all'insulina viene valutata iniettando insulina nel topo, con livelli di glucosio registrati a intervalli specifici.

In questo video, un ratto anestetizzato viene sottoposto a una procedura oculare in cui le perle magnetiche vengono iniettate nella camera anteriore sotto un campo magnetico per bloccare l'angolo iridocorneale. Questo blocco ostruisce la rete trabecolare, impedendo il drenaggio dell'umore acqueo e portando ad un aumento della pressione intraoculare, danneggiando le cellule gangliari retiniche e il nervo ottico. Questo sviluppa una condizione simile al glaucoma.

Fonte: Kummari, E., et. al., Microdissezione a cattura laser - Una dimostrazione dell'isolamento dei singoli neuroni dopaminergici e dell'intera area tegmentale ventrale., J. Vis. Exp. (2015)In questo video, dimostriamo il protocollo di immunoistochimica per i neuroni dopaminergici in sezioni di tessuto cerebrale per la successiva microdissezione a cattura laser.

Fonte: Bennett, S. A., et al., Caratterizzazione delle alterazioni delle modificazioni post-traduzionali degli istoni nei modelli di proteinopatia neurodegenerativa del lievito. J. Vis. Exp. (2019). Questo video mostra la procedura di valutazione delle modificazioni istoniche nelle cellule di lievito che sovraesprimono proteine neurodegenerative. Le fasi includono la lisi cellulare, la centrifugazione, l'elettroforesi, il trasferimento della membrana e la rilevazione basata su anticorpi degli...

Fonte: Yan, Z., et al. Valutazione dell'effetto anti-depressione di Xiaoyaosan su topi cronicamente stressati. J. Vis. Exp. (2019). Il video mostra il processo di creazione di un modello murino di depressione cronica indotta da stress e la valutazione dei comportamenti depressivi. L'applicazione cronica di vari fattori di stress innesca il rilascio di corticosterone, portando alla sovraeccitazione neuronale e alla morte neuronale, che si traduce in sintomi simili alla depressione nei topi.

Fonte: Bétemps, D., et al., Rilevamento della α-sinucleina associata alla malattia mediante ELISA potenziato nel cervello di topi transgenici che sovraesprimono la α-sinucleina umana mutata A53T. J. Vis. Exp. (2015). Questo video mostra la procedura per rilevare la proteina α-sinucleina associata alla malattia neurodegenerativa nel tessuto cerebrale di topi transgenici utilizzando ELISA. Le fasi includono l'omogeneizzazione dei tessuti, la centrifugazione e il rilevamento ELISA della proteina...

Fonte: Wulf, M., et.al. Protocollo basato su microdissezione laser per l'analisi LC-MS/MS del profilo proteomico di granuli di neuromelanina. J. Vis. Exp. (2021).Questo video mostra l'analisi di campioni di peptidi da granuli di neuromelanina (NMG) isolati da tessuto cerebrale umano post-mortem. I peptidi vengono prima separati mediante cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) e quindi analizzati mediante spettrometria di massa per determinare i loro rapporti massa/carica (m/z). I...

Fonte: Zhi, L. et al., Misurazione del tasso di consumo di ossigeno in fette striatali acute da topi adulti. J. Vis. Exp. (2022). Questo video mostra come misurare il tasso di consumo di ossigeno mitocondriale (OCR) in fette di cervello striatale di topo. Descrive in dettaglio i passaggi per preparare la piastra di tessuto e la cartuccia del sensore, caricarli nell'analizzatore di flusso e spiega i processi cellulari alla base dei modelli OCR.

Fonte: Josiah, S. S., et al. Studio delle funzioni e delle attività del co-trasportatore K-Cl neuronale KCC2 mediante Western blotting. J. vis. exp. (2022). Il video mostra i passaggi per rilevare e quantificare la proteina cotrasportatore 2 fosforilata del cloruro di potassio (KCC2) in un lisato cellulare. Questo processo prevede l'immunoprecipitazione per isolare la KCC2 fosforilata e la chemiluminescenza per quantificare la proteina isolata.

Fonte: Lani-Louzada, R., et al. Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori. J. Vis. Exp. (2022). Questo video dimostra la quantificazione delle cellule gangliari retiniche da retine di ratto fissate chimicamente e sottoposte a cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare. Il processo include la permeabilizzazione, la colorazione degli anticorpi e la controcolorazione nucleare, seguita dalla visualizzazione...

Fonte: Jensen, V. N., et al. Misurazione ripetuta dell'attività dei muscoli respiratori e della ventilazione in modelli murini di malattia neuromuscolare. J. Vis. Exp. (2017). Questo video mostra il metodo per registrare simultaneamente i segnali di pletismografia ed elettromiografia in un modello murino di SLA in movimento libero. La procedura prevede l'utilizzo di elettrodi impiantati e di un trasmettitore per catturare l'attività muscolare, insieme a una camera di pletismografia per...

Fonte: Jiang, X., et al. Incentivazione e valutazione di un modello murino di miopia sperimentale. J. Vis. Exp. (2019)Questo video mostra una procedura per indurre la miopia in un mouse attraverso l'installazione di una montatura per lenti personalizzata. La montatura è fissata al cranio esposto con adesivo dentale e vengono inserite lenti concave per spostare il punto focale dietro la retina. Questa configurazione stimola l'allungamento del bulbo oculare che porta alla miopia.

Fonte: Jolly, S., et.al. Combinazione di ibridazione a doppia fluorescenza in situ con immunomarcatura per il rilevamento dell'espressione di tre geni in sezioni cerebrali di topo. J. Vis. Exp. (2016). Questo video dimostra l'uso dell'ibridazione in situ a doppia fluorescenza per visualizzare l'espressione di due bersagli di RNA in sezioni cerebrali di topo. Il protocollo prevede il rilevamento sequenziale dell'RNA utilizzando sonde marcate con isotiocianato di fluoresceina e digossigenina,...

Fonte: Baleriola, J., et. al., Rilevamento di mRNA localizzati assonalmente in sezioni cerebrali utilizzando l'ibridazione in situ ad alta risoluzione. J. Vis. Exp. (2015)Questo video dimostra il rilevamento dell'mRNA all'interno degli assoni colinergici in fette fisse di ippocampo di topo utilizzando l'ibridazione fluorescente in situ e la colorazione degli anticorpi. La microscopia a fluorescenza rivela la localizzazione spaziale degli mRNA marcati con sonda e della colina acetiltransferasi...

Fonte: Zhang, J., et al. Analisi quantitativa ad alta risoluzione dell'immunooro dei recettori di membrana nelle sinapsi del nastro retinico. J. Vis. Exp. (2016)Questo video mostra una tecnica di microscopia elettronica per visualizzare la localizzazione del recettore dei neurotrasmettitori nelle sinapsi retiniche. Le sezioni retiniche contengono cellule gangliari retiniche che esibiscono recettori dei neurotrasmettitori legati alla membrana e sono marcate con la subunità B della tossina del...

Fonte: de March, C. A. et. al., Monitoraggio in vitro in tempo reale dell'attivazione del recettore odorizzante da parte di un odorizzante in fase vapore. J. Vis. Exp. (2019)Questo video dimostra il metodo per monitorare l'attivazione in tempo reale dei recettori degli odori nelle cellule di mammifero ricombinanti utilizzando la misurazione della luminescenza. Il legame con gli odori innesca l'attivazione delle proteine G e la produzione di cAMP, attivando le proteine glosensori che emettono...

Fonte: Alluri, H., et al. Deprivazione e riossigenazione di ossigeno-glucosio come modello di lesione da ischemia-riperfusione in vitro per lo studio della disfunzione della barriera emato-encefalica. J. Vis. Exp. (2015). Il video dimostra la localizzazione fluorescente delle proteine a giunzione stretta e delle fibre di stress nelle cellule endoteliali microvascolari del cervello di ratto (RBMEC). Nel monostrato stressato, gli anticorpi marcati in fluorescenza vengono utilizzati per marcare le...

Fonte: Eid, L. & Parent, M. Preparazione di tessuto cerebrale di primati non umani per l'immunoistochimica pre-inclusione e la microscopia elettronica. J. Vis. Exp. (2017). Questo video mostra la preparazione di tessuto cerebrale di primati non umani fissato con aldeide utilizzando l'immunoistochimica pre-incorporata per la microscopia elettronica. Delinea i passaggi per l'immunomarcatura di una specifica proteina neuronale, seguita da una reazione di perossidasi che produce un precipitato...

Fonte: Evilsizor, M. N., et. al., Primer per l'immunoistochimica su tessuto cerebrale di ratto criosezionato: esempio di colorazione per microglia e neuroni. J. Vis. Exp. (2015)Questo video mostra una procedura di colorazione immunoistochimica passo-passo su tessuto cerebrale di ratto criosezionato per visualizzare la disposizione spaziale di microglia e neuroni.

Fonte: Kirchner, K.N., et al., Un metodo di pulizia del tessuto idrofobico per il tessuto cerebrale di ratto. J. Vis. Exp. (2020). Questo video mostra il metodo di pulizia del tessuto idrofobico di un campione di tessuto cerebrale di ratto. Il campione viene disidratato in sequenza in metanolo, trattato con una miscela di diclorometano e metanolo per sciogliere lipidi e pigmenti e trasferito in etere dibenzilico per la completa pulizia dei tessuti, consentendo un imaging dettagliato senza...

Per rilevare questi batteri, prendere una sezione di cervello umano deparaffinizzata, reidratata e infetta da batteri con antigeni proteici esposti e fosfatasi endogena inattivata.

Il virus infetta i neuroni piramidali nella corteccia cerebrale e le proteine virali espresse si localizzano all'interno di strutture granulari intracitoplasmatiche note come corpi di inclusione.

Lavare per rimuovere la paraffina, quindi reidratare il tessuto utilizzando concentrazioni di alcol decrescenti.

Questo video dimostra l'isolamento di proteine della superficie cellulare e intracellulari da una coltura di astrociti. La coltura degli astrociti viene posta su ghiaccio per inibire l'endocitosi, quindi le proteine della superficie cellulare vengono marcate con un reagente di biotinilazione. Le cellule vengono lisate per rilasciare le proteine biotinilate della superficie cellulare e le proteine intracellulari non biotinilate. Infine, le perle rivestite di streptavidina vengono utilizzate per...

Questo video dimostra il processo di iniezione intracerebroventricolare per studiare la distribuzione del citomegalovirus murino (MCMV) nel cervello del topo neonatale. L'MCMV, progettato per esprimere una proteina fluorescente verde potenziata (EGFP) per la visibilità, viene iniettato nel ventricolo laterale del cervello di un cucciolo di topo. Il virus iniettato circola attraverso il liquido cerebrospinale, infettando le cellule della regione periventricolare, compresa la zona marginale, il...

Questo video dimostra la creazione di un modello in vitro di infezione da virus Zika in un cervello in via di sviluppo. Gli organoidi cerebrali umani contenenti rosette di cellule staminali, cellule progenitrici neurali (NPC) e neuroni sono infettati dal virus Zika. Il virus infetta gli NPC e innesca l'apoptosi, interrompendo lo sviluppo degli organoidi.

Il video dimostra la microiniezione di lipopolisaccaridi (LPS) nel cervello delle larve di zebrafish per indurre la neuroinfiammazione. Le larve vengono posizionate su un piatto foderato di agarosio, l'ago viene inserito nei ventricoli cerebrali e viene iniettato l'LPS. L'LPS iniettato innesca una risposta immunitaria che porta alla neuroinfiammazione.

Questo video dimostra la valutazione della salute mitocondriale negli astrociti geneticamente modificati, che esprimono una proteina fluorescente all'interno dei loro mitocondri. La proteina aiuta a tenere traccia dei cambiamenti nella salute mitocondriale quando la sua fluorescenza cambia da verde a rossa, indicando stress o danni. Le immagini vengono acquisite e analizzate utilizzando vari parametri.

Questo video dimostra la procedura di iniezione di virus chimerici dell'HIV nella corteccia del cervello di un ratto, dove l'RNA del virus si integra nel genoma dell'ospite, si replica e si diffonde per stabilire un'infezione da HIV attiva nel modello sperimentale.

Questo video dimostra la generazione di un modello murino con un'infezione del SNC. A un cucciolo da latte viene iniettato il virus sia per via intracranica che intraperitoneale. Il virus si diffonde, infettando il SNC causando la morte delle cellule neuronali e l'infiammazione. Il cucciolo viene valutato per i sintomi dell'infezione man mano che la malattia progredisce.

Questo video dimostra la generazione della neuroinfiammazione in un modello murino. Viene prelevato un topo anestetizzato con micro-ferite e sulle ferite viene applicato un inoculo di virus della pseudorabbia (PRV). Il virus infetta i nervi periferici, si diffonde ai gangli della radice dorsale (DRG) e infetta ulteriormente il midollo spinale e il cervello. L'infezione dei neuroni nel sistema nervoso porta a una risposta immunitaria che induce danni neuronali, portando alla neuroinfiammazione.

Il video mostra l'iniezione intracerebrale di sospensione del virus Zika in un topo adulto per indurre la neurodegenerazione. Un topo anestetizzato viene fissato in un telaio stereotassico e viene praticato un foro nel cranio esposto per l'iniezione. Una sospensione del virus Zika viene iniettata nel tessuto cerebrale. L'infezione virale provoca infiammazione, portando alla neurodegenerazione.

Questo video dimostra la quantificazione della carica batterica infettiva dal cervello di topo perfuso infettato da Listeria monocytogenes.

Questo video mostra un metodo per studiare la permeazione attraverso un modello di barriera emato-encefalica (BBB) in vitro utilizzando astrociti e cellule endoteliali su un inserto di membrana, con FITC libero e ferritina caricata con FITC. FITC-ferritina si è legata ai recettori sulle cellule endoteliali e ha attraversato la barriera di membrana fino alla camera inferiore, mentre la FITC libera ha mostrato una permeazione limitata ed è rimasta nella camera superiore.

Questo video mostra una procedura per infettare le cellule staminali neurali fetali umane con il virus Zika. Le cellule infette possono essere utilizzate per ulteriori studi.

Questo video mostra un modello in vitro per studiare i patogeni che attraversano la barriera emato-encefalica (BEE). Le cellule endoteliali microvascolari, che esprimono giunzioni strette, formano uno strato endoteliale nella camera superiore, mentre i neuroni, gli astrociti e la microglia rappresentano il parenchima cerebrale nella camera inferiore, separati da una membrana porosa. L'infezione virale nel modello BBB imita l'agente patogeno che passa dal sangue al cervello. Dopo l'introduzione...

Fonte: Funes, S., et. al., Cellule simili alla microglia umana: differenziazione da cellule staminali pluripotenti indotte e saggio di fagocitosi su cellule vive in vitro utilizzando sinaptosomi umani. J. Vis. Exp. (2022)Questo video mostra un test per studiare la capacità fagocitaria di cellule simili alla microglia utilizzando sinaptosomi marcati con coloranti fluorescenti sensibili al pH.

Immergere il fazzoletto nello xilene per sciogliere la paraffina.

Iniettare per via endovenosa l'albumina marcata con fluoroforo, che attraversa la BBB danneggiata, raggiungendo il cervello.

Il tessuto mostra fibrille amiloidi e aggregati proteici anomali nelle pareti dei vasi cerebrali, che sono indicatori chiave di disturbi neurologici.

La MCCH è caratterizzata da un ridotto flusso sanguigno al cervello. Ciò limita l'apporto di ossigeno e nutrienti allo strato di cellule endoteliali dei vasi sanguigni cerebrali, danneggiando le cellule.

Sospendere la miscela cellulare in una matrice extracellulare o in una soluzione ECM.

Praticare un'incisione sul collo per esporre e legare liberamente le arterie carotidi comuni bilaterali.

Questo video mostra il metodo per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) iniettando peptidi derivati dalla mielina con un adiuvante per attivare le cellule T autoreattive, che migrano verso il cervello. La tossina della pertosse viene somministrata per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica, consentendo a queste cellule T e ad altre cellule immunitarie di entrare nel cervello. Queste cellule immunitarie causano demielinizzazione, portando a una compromissione...

Questo video mostra una procedura per valutare l'interruzione della barriera emato-encefalica in un modello murino EAE. Coloranti fluorescenti di diverse dimensioni vengono iniettati per via retro-orbitale e circolano attraverso i vasi sanguigni del cervello. Il colorante più piccolo fuoriesce attraverso le fessure nel tessuto cerebrale, mentre il colorante più grande entra solo se l'interruzione è grave, correlata all'entità del danno alla barriera.

Questo video mostra una procedura per indurre danni ai tessuti o infarto nel ponte di un ratto anestetizzato utilizzando la stimolazione elettrica.

In questo video, gli embrioni fecondati di zebrafish vengono decorionati sotto uno stereomicroscopio e poi esposti a un inibitore della sintesi del colesterolo, portando allo sviluppo di rotture dei vasi sanguigni ed emorragie cerebrali nelle larve. Le larve emorragiche, identificabili da macchie rosse distinte, vengono successivamente separate al microscopio per ulteriori analisi.

Questo video dimostra il processo di induzione dell'interruzione della barriera emato-encefalica (BBB) e delle microemorragie cerebrali in un modello di ratto utilizzando lipopolisaccaride (LPS). Evidenzia la sequenza delle risposte immunitarie che portano ad un aumento della permeabilità della BBB e al conseguente danno al tessuto cerebrale.

Questo video mostra un test per rilevare microemorragie cerebrali (CMH) in un modello di ratto. Le CMH sono emorragie cerebrali dovute alla rottura della barriera emato-encefalica, identificate dalla fuoriuscita di globuli rossi (RBC). In un modello di ratto, il tessuto cerebrale fissato viene crioprotetto, sezionato e colorato con ematossilina-eosina per i globuli rossi, consentendo la visualizzazione microscopica dei CMH. I globuli rossi trapelati appaiono al microscopio in rosso-arancio.

Il video mostra la procedura per la creazione di un modello murino per studiare la lesione cerebrale ipossico-ischemica neonatale. Delinea i passaggi per indurre chirurgicamente l'ischemia e sottoporre l'animale all'ipossia per esacerbare il danno cerebrale. Infine, mostra come valutare le lesioni cerebrali risultanti, assicurando che il modello murino sia preparato per ulteriori indagini scientifiche.

Questo video dimostra come caratterizzare lo spazio extracellulare in una fetta di cervello utilizzando microelettrodi iono-selettivi e ionoforesi per misurare e confrontare i segnali elettrici. Questo processo aiuta a determinare la frazione di volume dello spazio e il grado di torsione.

In questo video, un Multielectrode Array (MEA) rivestito con glutammato ossidasi viene impiantato nel tessuto cerebrale di un topo anestetizzato. La soluzione di glutammato viene iniettata nello spazio extracellulare dove il MEA rileva i livelli di glutammato, consentendo il monitoraggio in tempo reale dell'assorbimento di glutammato da parte degli astrociti.

In questo video, un cucciolo di topo geneticamente modificato che porta il gene Ccm2 affiancato da siti loxP e Cre ricombinasi fusa a un recettore degli estrogeni viene utilizzato per indurre malformazioni cavernose cerebrali (CCM). La somministrazione di 4-idrossitamoxifene attiva Cre nelle cellule endoteliali, portando alla delezione di Ccm2 e alla formazione di CCM nel cervello.

Questo video dimostra la procedura per isolare le cellule cerebrali e le cellule immunitarie infiltrate dai tessuti cerebrali ischemici di topo mediante digestione enzimatica, seguita dalla rimozione dei detriti cellulari e della mielina mediante centrifugazione a gradiente di densità, per studiare le risposte all'infiammazione nella ricerca sull'ictus.

Il video dimostra l'induzione di un'emorragia subaracnoidea tramite perforazione endovascolare in un modello murino. Viene praticata un'incisione nella regione del collo del topo anestetizzato per accedere all'arteria carotide comune e alla sua biforcazione. Un filamento viene inserito attraverso le arterie per perforare un ramo dell'arteria intracranica, inducendo un'emorragia subaracnoidea.

Questo video mostra un metodo per generare un modello di ratto di emorragia intraventricolare neonatale. In questa procedura, a un cucciolo di ratto anestetizzato viene iniettata emoglobina nel ventricolo laterale del cervello. L'emoglobina provoca stress ossidativo e rilascia eme, simulando un'emorragia intraventricolare. Il conseguente danno ai tessuti cerebrali, guidato da specie reattive dell'ossigeno e citochine infiammatorie, porta all'ingrossamento ventricolare, una conseguenza comune...

Questo video mostra la procedura di esecuzione dell'occlusione permanente dell'arteria cerebrale media distale, o MCAO, con l'arteria carotide comune, o legatura CCA, nei ratti anziani per modellare l'ictus ischemico. Questo blocca il flusso sanguigno al cervello, portando alla morte neuronale e generando un modello per studiare i meccanismi dell'ictus e i potenziali trattamenti.

Questo video mostra la procedura per stabilire un modello di ratto con emorragia subaracnoidea. A un ratto anestetizzato viene impiantate sonde per misurare la pressione intracranica e il flusso sanguigno cerebrale. Il sito target viene identificato e l'ago viene inserito in una posizione pre-chiasmatica. Il sangue autologo viene quindi iniettato nello spazio subaracnoideo, aumentando la pressione intracranica e diminuendo il flusso sanguigno cerebrale, stabilendo il modello.

Questo video mostra un'indagine sperimentale sulla trasmigrazione dei linfociti attraverso un modello di endotelio della barriera emato-encefalica (BBB). Un monostrato di cellule endoteliali microvascolari cerebrali umane (HBMEC) viene generato in vitro e al monostrato vengono aggiunte cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) contenenti linfociti. Le cellule vengono quindi incubate per consentire la trasmigrazione dei linfociti e le cellule migrate vengono quantificate utilizzando la...

Questo video mostra la valutazione della zona dell'infarto e dell'edema cerebrale in fette di cervello di ratti sottoposti a occlusione dell'arteria cerebrale media. Le aree infartuate vengono identificate utilizzando la colorazione redox, mentre un filtro blu e una funzione di soglia nel software di analisi delle immagini quantificano la zona dell'infarto e l'edema nell'emisfero interessato.

Questo video mostra un metodo per valutare la resistenza elettrica transendoteliale (TEER) nelle cellule endoteliali microvascolari cerebrali di topo in vitro. Un valore TEER elevato indica giunzioni di cellule endoteliali intatte, mentre l'aggiunta di cellule T attivate abbassa il valore TEER, riflettendo la rottura della barriera giunzionale.

Questo video mostra una procedura per la denervazione simpatica dell'arteria renale in un modello murino iperteso indotto da angiotensina II, utilizzando il fenolo per interrompere la funzione del nervo simpatico e ridurre la pressione sanguigna.

Questo video mostra il processo di induzione dell'ictus ischemico in un modello di ratto occludendo l'arteria cerebrale media (MCA) utilizzando un bullone filettato. La procedura prevede la legatura delle arterie carotidi, l'inserimento di un bullone filettato nell'arteria carotide esterna e il blocco del flusso sanguigno dall'MCA al cervello, portando alla morte neuronale e imitando un ictus ischemico.

Questo video mostra la procedura di replicazione di un ictus trombotico in un modello murino bloccando l'arteria carotide comune destra ed esponendo il topo a un ambiente a basso contenuto di ossigeno. Questo processo riduce il flusso di sangue e ossigeno al cervello, causando la formazione di coaguli di sangue e danni cerebrali.

Questo video mostra la tecnica precisa per indurre un ictus della sostanza bianca in un topo anestetizzato iniettando un inibitore dell'ossido nitrico a coordinate cerebrali mirate all'interno della sostanza bianca. Ciò porta alla costrizione dei vasi sanguigni e all'inibizione dell'afflusso di sangue, con conseguente danno neuronale e ictus cerebrale.

Fonte: Wanderer, S., et al. Modello di aneurisma della biforcazione microchirurgica della sacca arteriosa nel coniglio. J. Vis. Exp. (2020)Questo video mostra la creazione di un modello sperimentale di aneurisma in un coniglio utilizzando una sacca vascolare trattata con elastasi. Dopo aver asportato un segmento del CCA destro, la sacca viene trattata con elastasi, quindi suturata al CCA sinistro per ripristinare il flusso sanguigno. Lo stress risultante sulle pareti indebolite della sacca...

Fonte: Sharma, T. P., et al., Modello di sistema autonomo translaminare per la modulazione della pressione intraoculare e intracranica nei segmenti posteriori di donatori umani. J. Vis. Exp. (2020). Questo video mostra la procedura di preparazione di un occhio umano per studiare gli effetti della pressione translaminare sulla segnalazione delle cellule gangliari retiniche simulando le pressioni intraoculari e intracraniche in un sistema translaminare autonomo.

Fonte: Lani-Louzada, R., et al., Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori. J. Vis. Exp. (2022)Questo video dimostra l'induzione e il monitoraggio di un'elevata pressione intraoculare (IOP) in un modello di ratto. Il processo prevede la cauterizzazione dei vasi sanguigni limbari, con conseguente occlusione dei vasi e IOP elevata. Il ratto viene quindi lasciato riprendersi e la IOP viene regolarmente monitorata sia...

Fonte: Jungen, C., et al. Impatto dei neuroni intracardiaci sull'elettrofisiologia cardiaca e sull'aritmogenesi in un sistema di Langendorff ex vivo. J. Vis. Exp. (2018). Il video mostra una tecnica ex vivo per stimolare il sistema nervoso intracardiaco a valutare la suscettibilità del cuore all'aritmia. Utilizzando un apparato di perfusione, un cuore di topo isolato viene perfuso con un tampone ossigenato. Il sistema nervoso intracardiaco viene quindi stimolato ad alta frequenza per indurre...

Fonte: Hakim, M. A. et al., Isolamento e analisi funzionale dell'endotelio arteriolare del parenchima cerebrale di topo. J. Vis. Exp. (2022). Questo video mostra l'analisi funzionale di un tubo endoteliale arteriolare isolato da un cervello di topo. Delinea i passaggi per misurare i livelli intracellulari di calcio e il potenziale di membrana, sia al basale che in risposta alla stimolazione farmacologica.

Fonte: Tang, X. et. al., Emorragia pontina massiccia mediante doppia iniezione di sangue autologo. J. Vis. Exp. (2021)Questo protocollo descrive l'infusione controllata di sangue autologo nella regione pontina del cervello di un ratto per modellare una massiccia emorragia pontina. Lo scopo è quello di simulare un'emorragia cerebrale localizzata aumentando la pressione localizzata.

Fonte: Alluri, H., et.al. Deprivazione e riossigenazione di ossigeno-glucosio come modello di lesione da ischemia-riperfusione in vitro per lo studio della disfunzione della barriera emato-encefalica. J. Vis. Exp. (2015).Il video dimostra l'impatto della privazione di ossigeno-glucosio e della successiva riossigenazione sulle cellule endoteliali microvascolari del cervello di ratto (RBMEC) simulando condizioni ipossiche e prive di nutrienti. Queste condizioni provocano la deplezione dell'ATP,...

Fonte: Gucciardo, E., et. al., Un modello di coltura tissutale ex vivo per le complicanze fibrovascolari nella retinopatia diabetica proliferativa. J. Vis. Exp. (2019)Questo video descrive in dettaglio un protocollo di immunocolorazione per colture ex vivo di tessuto fibrovascolare incorporato in gel di fibrina. Ciò consente una visualizzazione dettagliata delle alterazioni vascolari associate alla retinopatia diabetica...

Fonte: Talley Watts, L., et al. Fototrombosi del Rose Bengal mediante imaging ottico confocale in vivo: un modello di ictus a vaso singolo. J. Vis. Exp. (2015)Questo video dimostra una tecnica per indurre la formazione di coaguli di sangue nel cervello di un topo. Un topo anestetizzato con una finestra cranica e un cranio assottigliato va incontro a fototrombosi attraverso l'attivazione di un colorante fotosensibile utilizzando luce ad alta intensità. Questo processo genera specie reattive...

Fonte: Kuts, R. et al. Lesione cerebrale indotta dal laser nella corteccia motoria dei ratti. J. Vis. Exp. (2020)Questo video dimostra la valutazione dell'integrità della barriera emato-encefalica (BBB) a seguito di una lesione cerebrale indotta dal laser nei ratti. Un colorante tracciante viene iniettato nella vena della coda, permettendogli di circolare nel cervello e di fuoriuscire nel tessuto attraverso la BBB danneggiata. Il cervello viene quindi estratto e lavorato per rilasciare il...

Gli astrociti secernono molecole di segnalazione che migliorano la maturazione e la differenziazione delle cellule staminali in neuroni e astrociti.

Questo video mostra un metodo per testare la migrazione degli interneuroni in risposta a segnali chemioattraenti da cellule endoteliali periventricolari (PVEC). Gli interneuroni sono collocati in un compartimento centrale, con PVEC e cellule di controllo su entrambi i lati. L'aumento della migrazione verso i PVEC indica una risposta positiva ai loro segnali chemioattraenti.

Questo video dimostra la colorazione in immunofluorescenza di fette di organoidi cerebellari per identificare specifici antigeni bersaglio espressi in vari neuroni cerebellari, che sono indicativi della maturazione dell'organoide.

Questo video dimostra il metodo di identificazione dei neuroni da una coltura mista di neuroni di granuli cerebellari e cellule gliali utilizzando la doppia colorazione con fluoresceina diacetato (FDA) e ioduro di propidio (PI), dove i neuroni vivi appaiono verdi e i neuroni morti appaiono rossi.

Questo video dimostra un protocollo dettagliato di immunocolorazione per visualizzare i difetti fenotipici nei corpi dei funghi dei cervelli mutanti di Drosophila. Il protocollo prevede l'utilizzo di anticorpi contro Fas2, una proteina coinvolta nella guida assonale che facilita il corretto sviluppo morfologico e funzionale del corpo del fungo.

Questo video mostra la procedura per colorare le cellule staminali neurali appena proliferate in sezioni di tessuto cerebrale utilizzando l'incorporazione di EdU, seguita dall'immunofluorescenza per visualizzare proteine specifiche, migliorando la comprensione della dinamica cellulare e della proliferazione.

Questo video dimostra la colorazione in immunofluorescenza di criosezioni da tessuti craniofacciali embrionali di topo, utilizzando la microscopia a fluorescenza per valutare l'espressione di marcatori nucleari e determinare la proliferazione cellulare e l'attività di segnalazione.

Questo video dimostra come le vescicole neuronali siano marcate con specifiche proteine fluorescenti per visualizzare il loro movimento. In primo luogo, un plasmide codificante per una proteina fluorescente viene incubato con un agente di trasfezione e quindi introdotto in una coltura di neuroni. Successivamente, le immagini dei neuroni vengono acquisite e analizzate per tracciare il movimento delle vescicole.

Questo video dimostra la misurazione della secrezione di acido retinoico (RA) dalle cellule della neurosfera utilizzando cellule reporter RA. Delinea i passaggi coinvolti nella co-coltura delle cellule della neurosfera con le cellule reporter dell'AR e nell'esecuzione di un test colorimetrico dell'AR per misurare i livelli di AR.

Questo video dimostra l'immunocolorazione del tratto gastrointestinale murino embrionale per visualizzare e analizzare la distribuzione della popolazione neuronale utilizzando l'immunofluorescenza e la microscopia confocale.

Questo video dimostra la marcatura virale e il trapianto di cellule di eminenza gangliare mediale (MGE) per studi in vivo. Delinea i passaggi coinvolti nella trasduzione delle cellule MGE con un reporter virale, trapiantando queste cellule trasdotte nella corteccia di un cucciolo di topo e consentendo l'espressione del reporter in specifici sottotipi di interneuroni.

Questo video dimostra l'isolamento di nuclei ricchi di recettori dell'ossitocina dal cervello di ratto neonatale. Il taglio coronale, seguito dall'identificazione e dalla punzonatura precisa dei nuclei cerebrali ricchi di recettori dell'ossitocina, consente l'estrazione efficace dei nuclei ricchi di recettori dell'ossitocina per ulteriori analisi.

Fonte: Pericoli, G. et. al., Saggi di immunocitochimica a cellule 3D vive del glioma diffuso della linea mediana pediatrica. J. Vis. Exp. (2021)Questo video mostra l'imaging di cellule vive per osservare la migrazione delle cellule di glioma diffuso della linea mediana pediatrica utilizzando la marcatura immunoistochimica con anticorpi anti-CD44.

Fonte: Jantzie, L. L., et. al. Modellazione dell'encefalopatia del prematuro utilizzando l'ipossia-ischemia prenatale con lipopolisaccaride intra-amniotico nei ratti. J. Vis. Exp. (2015)Questo video dimostra un protocollo per indurre condizioni ipossico-ischemiche e infiammatorie nei ratti fetali limitando il flusso sanguigno uterino e iniettando LPS, modellando la neuroinfiammazione e lo sviluppo cerebrale interrotto rilevanti per gli studi sulla nascita pretermine.

Fonte: Larpthaveesarp, A., et. al. Modello transitorio di occlusione dell'arteria cerebrale media di ictus neonatale nei ratti P10. J. Vis. Exp. (2017)Questo video mostra l'istituzione del modello di occlusione dell'arteria cerebrale media in un cucciolo di ratto. L'arteria carotide interna (ICA) è esposta e una legatura è fissata per limitare il flusso di sangue. Un occlude viene inserito attraverso l'ICA per raggiungere l'arteria cerebrale media. Il cucciolo viene quindi lasciato riprendersi...

La malattia innesca le cellule immunitarie autoreattive ad attaccare le proteine della mielina, degradando la guaina mielinica che circonda gli assoni neuronali.

La sezione di controllo presenta assoni con guaine mieliniche strettamente impacchettate contenenti strati concentrici di membrana plasmatica. La sezione lesa presenta mielina decompattata con ampi spazi vuoti.

Lo stress compromette la funzione degli oligodendrociti, interrompendo la guaina mielinica ricca di lipidi che circonda gli assoni neuronali nella corteccia prefrontale mediale, una regione del cervello che regola le emozioni.

Questo video dimostra l'immunoprecipitazione di frammenti di DNA reticolati con proteine bersaglio da lisati di motoneuroni derivati da cellule staminali utilizzando perle magnetiche rivestite di anticorpi specifici per proteine bersaglio.

Questo video dimostra un protocollo per valutare l'integrità strutturale delle giunzioni neuromuscolari nei muscoli longitudinali dorsali di Drosophila. La procedura prevede la colorazione di neuroni e muscoli con due anticorpi distinti e il confronto dei modelli di fluorescenza tra mosche mutanti e wild-type. Una riduzione della colorazione neuronale nei moscerini mutanti indica neurodegenerazione, mentre la struttura muscolare rimane intatta.

Questo video dimostra la valutazione degli effetti neurodegenerativi di una sostanza chimica in esame su Caenorhabditis elegans con neuroni marcati in fluorescenza. I neuroni normali mostrano una fluorescenza brillante del soma intatto e dei processi, mentre la fluorescenza diminuita, il soma gonfio e i processi punteggiati indicano neurodegenerazione.

Questo video mostra un metodo per stabilire un modello di neuropatia a piccole fibre nei topi utilizzando l'agonista TRPV1 resiniferatossina (RTX). Delinea i passaggi coinvolti nella somministrazione di RTX ai topi e spiega come RTX induce la morte neuronale nei neuroni sensoriali di piccolo diametro, stabilendo così il modello di neuropatia.

In questo video, un modello murino di sclerosi multipla viene stabilito utilizzando l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE). Al topo viene iniettata un'emulsione contenente un peptide neuronale e un adiuvante, innescando una risposta immunitaria che attiva le cellule T autoreattive. Questo è seguito da un'iniezione di tossina della pertosse (PTX) per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica, consentendo alle cellule T autoreattive di infiltrarsi nel cervello. Questa...

Questo video mostra la procedura per indurre la paralisi trasferendo cellule Th17 attivate che hanno come bersaglio l'acquaporina-4 in un modello murino. Nel sistema nervoso centrale, le cellule Th17 attivate interagiscono con gli astrociti che esprimono l'acquaporina-4, innescando una risposta immunitaria che porta alla paralisi della coda e degli arti nel topo.

Questo video dimostra il processo di valutazione della disfunzione motoria in un modello murino attraverso la somministrazione della tossina della pertosse e di un inoculo contenente peptidi e adiuvanti che imitano la mielina, seguiti da test su tapis roulant per valutare la funzione motoria e valutare il danno nervoso risultante dovuto all'attivazione immunitaria e alla demielinizzazione.

Questo video mostra il test delle scale per valutare la funzione motoria in un ratto emiparkinsoniano con una lesione cerebrale destra. La lesione interrompe la segnalazione della dopamina, compromettendo il controllo della zampa sinistra, il che si traduce in più pellet che rimangono sulle scale sinistre, indicando una disfunzione motoria.

Questo video dimostra l'uso di un test di locomozione radiale per valutare la disfunzione motoria in C. elegans che esprime la proteina TDP-43 umana wild-type o ALS-mutant. I vermi con livelli variabili di espressione di TDP-43 wild-type o mutante sono autorizzati a strisciare e il loro movimento è misurato dalla distanza radiale percorsa dal punto centrale sulla piastra del saggio. Il test distingue tra menomazioni motorie lievi, moderate e gravi in base alla distanza percorsa dai diversi...

Questo video mostra la valutazione del muscolo utilizzando motoneuroni in coltura, cellule di Schwann e miotubi, seguita dal trattamento con un bloccante neuromuscolare per inibire la contrazione. I grafici time-motion codificati a colori mostrano un time-motion graphic codificato a colori. Il rosso indica il movimento più veloce e il blu indica il più lento.

Questo video dimostra la visualizzazione delle interazioni proteina-proteina alla giunzione neuromuscolare di Drosophila (NMJ) utilizzando il Proximity Ligation Assay (PLA). Dopo aver isolato le pareti corporee, le proteine interagenti vengono sondate con anticorpi primari e anticorpi secondari coniugati con PLA. La vicinanza delle proteine interagenti facilita la legatura delle sonde con oligonucleotidi connettori, formando DNA circolare, che viene poi amplificato dall'amplificazione del...

Fonte: Wagner, K. et al., Studio del traffico proteico di membrana nelle cellule fotorecettrici di Drosophila utilizzando proteine marcate con eGFP. J. Vis. Exp. (2022). Questo video mostra la visualizzazione del traffico proteico di membrana nelle cellule fotorecettrici di Drosophila utilizzando proteine TRPL marcate con eGFP. Descrive in dettaglio la preparazione di mosche transgeniche per l'imaging, l'acquisizione di immagini a fluorescenza di cellule fotorecettrici e la quantificazione del...

Fonte: Deseure, K., et al. Lesione da costrizione cronica del nervo infraorbitale del ratto (IoN-CCI) per studiare il dolore neuropatico del trigemino. J. Vis. Exp. (2015). Questo video mostra un metodo per indurre dolore neuropatico in un modello di ratto restringendo il nervo infraorbitale. Dopo aver esposto il nervo infraorbitale e aver legato le legature per restringerlo, la risposta immunitaria nel sito della lesione aumenta l'eccitabilità dei neuroni vicini, che trasmettono segnali di...

Fonte: Brakkee, E. M., et al. Chirurgia e test comportamentali nel modello di trasposizione del neuroma tibiale nei ratti. J. Vis. Exp. (2023). Questo video mostra una procedura per generare un modello di trasposizione del neuroma tibiale (TNT) di ratto. Dopo aver esposto il nervo tibiale nella zampa posteriore di un ratto anestetizzato, sezionare il nervo. Quindi, crea un tunnel sottocutaneo, infila il nervo reciso attraverso il tunnel e suturalo in posizione. In assenza di un bersaglio per...

Fonte: Lee, D. et. al., Condizioni sperimentali modificate per la perdita dell'udito indotta dal rumore nei topi e valutazione della funzione uditiva e del danno alle cellule ciliate esterne. J. Vis. Exp. (2023)Questo video dimostra la procedura di perdita dell'udito indotta dal rumore nei topi. Il suono ad alto volume danneggia le cellule ciliate dell'orecchio interno e interrompe le vie uditive, con conseguente compromissione dell'udito.

Fonte: Lee, D., et. al. Condizioni sperimentali modificate per la perdita dell'udito indotta dal rumore nei topi e valutazione della funzione uditiva e del danno alle cellule ciliate esterne. J. Vis. Exp. (2023)Questo video mostra la misurazione della risposta uditiva del tronco encefalico (ABR) in un topo. Gli elettrodi sono posizionati sulla testa, dietro l'orecchio e vicino alla coda di un topo anestetizzato. Vengono erogati stimoli acustici a varie intensità e i segnali elettrici generati...

Fonte: Olmstead, D. N., et al., Assotomia del nervo facciale nei topi: un modello per studiare la risposta dei motoneuroni alle lesioni. J. Vis. Exp. (2015). Questo video mostra la procedura di schiacciamento del nervo facciale in un topo, in cui la dissezione smussata attraverso punti di riferimento chiave espone il tronco del nervo facciale al forame stilomastoideo. Le pinze vengono quindi utilizzate per comprimere il tronco nervoso, inducendo danni assonali e interrompendo la trasmissione...

Fonte: Cheah, M., et al. Iniezione del ganglio della radice dorsale e lesione da schiacciamento della radice dorsale come modello per la rigenerazione sensoriale degli assoni. J. Vis. Exp. (2017). Questo video mostra una procedura passo-passo per iniettare una sospensione virale nei gangli della radice dorsale (DRG) e indurre una lesione assonale controllata attraverso uno schiacciamento della radice dorsale in un ratto anestetizzato. Il protocollo prevede l'esposizione dei DRG, la...

Per rilevare la morte cellulare apoptotica utilizzando il test TUNEL, trattare la fetta di cervello con l'enzima proteinasi-K.

Utilizzando la microscopia a fluorescenza, visualizzare il nervo danneggiato, che mostra un progressivo aumento dei gonfiori e delle disconnessioni assonali.

L'incapsulamento del farmaco migliora la specificità delle cellule tumorali e riduce la neurotossicità.

Questo video dimostra la somministrazione di lesioni cerebrali traumatiche (TBI) nei topi. Dopo aver esposto il cranio, il sito del trauma cranico viene contrassegnato. Il mouse viene quindi posizionato sotto il dispositivo TBI. L'impatto viene sferrato sollevando l'asta di metallo e lasciandola cadere liberamente sull'impattatore, che è a contatto con il cranio.

Questo video dimostra la colorazione in immunofluorescenza di neuroni ippocampali di ratto coltivati all'interno di un chip microfluidico per analizzare la maturazione e la connettività neuronale.

Questo video dimostra la generazione di un modello di lesione neuronale nei neuroni dei granuli cerebellari primari di topo. Delinea i passaggi coinvolti nell'induzione del danno neuronale utilizzando NMDA, un agonista del recettore dei neurotrasmettitori eccitatori, e glicina, un co-agonista. NMDA e glicina si legano a specifici recettori neuronali, causandone la sovrastimolazione e provocando un massiccio afflusso intracellulare di calcio, che porta al danno e alla morte delle cellule...

Questo video dimostra la colorazione in immunofluorescenza di una fetta di cervello di topo per quantificare la distribuzione di una specifica proteina presinaptica. Il processo prevede il blocco di siti aspecifici, l'applicazione di anticorpi primari per la proteina bersaglio e un marcatore di riferimento, seguiti dalla marcatura degli anticorpi secondari e dalla controcolorazione nucleare. Il marcatore di riferimento garantisce una quantificazione accurata fornendo una linea di base coerente...

Questo video mostra un metodo per studiare la lesione cerebrale larvale del pesce zebra utilizzando la microscopia elettronica a trasmissione a scansione su larga scala (STEM), una tecnica che combina elementi di microscopia elettronica a scansione (SEM) e microscopia elettronica a trasmissione (TEM) per produrre immagini ad alta risoluzione. Descrive le fasi coinvolte nella preparazione dei campioni e nell'acquisizione di immagini STEM ad alta risoluzione per identificare le lesioni cerebrali.

Questo video mostra un protocollo chirurgico su un modello di ratto, descrivendo in dettaglio i passaggi dalla preparazione dell'anestesia all'induzione della lesione del nervo facciale. Questo protocollo è utile per studiare la rigenerazione nervosa e le tecniche chirurgiche nella ricerca medica.

Questo video mostra la procedura per indurre una lesione cerebrale traumatica a cranio aperto in un topo praticando un'incisione del cranio sulla linea mediana, perforando il cranio e rimuovendo il lembo osseo per esporre la corteccia cerebrale e applicando un'alta pressione per indurre un trauma. La ferita viene quindi suturata per preparare il modello murino per gli esperimenti successivi.

Questo video dimostra la procedura per indurre la morte cerebrale in un modello murino aumentando la pressione intracranica controllata attraverso un catetere a palloncino, imitando la morte cerebrale naturale.

Questo video mostra una procedura per generare una lesione cerebrale precisa e controllata nella corteccia motoria del ratto utilizzando un laser.

Questo video dimostra la biotinilazione e la marcatura fluorescente di sialoglicoproteine modificate in cellule staminali neurali primarie e progenitrici, nonché neuroni, e la loro visualizzazione utilizzando la microscopia a fluorescenza.

In questo video, un dispositivo a tubo d'urto viene utilizzato per generare un'onda d'urto rompendo un diaframma in polimero attraverso una pressurizzazione controllata. L'onda d'urto colpisce le fette di cervello contenute in una borsa sicura, provocando lesioni traumatiche alla fetta di cervello.

Questo video dimostra la procedura per preparare neuroni in coltura per l'analisi ottica di vescicole sinaptiche riciclate. Il processo prevede l'etichettatura a fluorescenza delle proteine delle vescicole sinaptiche e l'immunocolorazione per etichettare e visualizzare le vescicole riciclate all'interno dei neuroni.

Questo video dimostra il processo di induzione della lesione da stiramento su neuroni derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSCN). Le cellule vengono prelevate in una piastra multipozzetto senza fondo con una membrana di silicone attaccata. Lo stress meccanico controllato viene applicato sulla membrana per indurre l'interruzione del citoscheletro e il danno alla membrana cellulare, inducendo un fenotipo di lesione da stiramento nelle cellule.

Questo video mostra una procedura per infliggere una lesione traumatica a testa chiusa nelle mosche Drosophila anestetizzate utilizzando un dispositivo di sciopero con un impattatore a gas. La lesione influisce sulla funzione neuronale e compromette la capacità di camminare.

Questo video mostra la procedura di coltellata corticale nei topi, che coinvolge l'esposizione del cranio e la creazione di lesioni cerebrali. Induce l'astrogliosi reattiva, una risposta neuroprotettiva degli astrociti, per studiare i traumi del SNC, l'infiammazione e i meccanismi di riparazione.

Il video dimostra un metodo per generare un modello murino di lesione cerebrale traumatica (TBI) utilizzando un dispositivo a percussione fluida laterale (LFPI). Dopo aver anestetizzato il topo, il cervello viene esposto creando una finestra sul cranio. Una cannula riempita di soluzione salina viene attaccata alla finestra e quindi collegata all'LFPI. Il pendolo del dispositivo viene rilasciato per creare un impulso di pressione che infligge una lesione cerebrale traumatica.

Questo video mostra la procedura per indurre una lesione cerebrale traumatica (TBI) in un modello murino. Un topo anestetizzato con un cranio esposto viene prelevato per creare un'apertura nel cranio, quindi viene indotta una lesione corticale controllata utilizzando un dispositivo di impatto. La lesione danneggia il tessuto cerebrale, causando una compromissione della funzione cognitiva e della coordinazione motoria.

Questo video mostra la procedura chirurgica per l'esecuzione di un'emisezione del midollo spinale toracico nei ratti. Descrive i passaggi per esporre il segmento del midollo spinale T8, eseguire l'emisezione per interrompere i tratti neurali su un lato e fornire assistenza post-operatoria.

Questo video mostra un metodo per indurre un danno neuronale mirato nelle larve di Drosophila utilizzando un laser ad alta potenza. Dopo aver posizionato la larva al microscopio, un laser a bassa potenza esegue la scansione dei neuroni fluorescenti, quindi la potenza del laser viene aumentata per indurre un danno localizzato. La lesione è confermata da un aumento della fluorescenza e da un cratere nel sito della lesione.

Il video dimostra l'uso di un dispositivo HIT (High-Impact Trauma) per indurre una lesione cerebrale traumatica a testa chiusa (TBI) in Drosophila. Il trauma cranico provoca un trauma cerebrale meccanico che colpisce la funzione neuronale, che nel tempo porta alla neurodegenerazione e alla mortalità.

Questo video dimostra l'induzione di una lesione cerebrale traumatica penetrante nel cervello della drosofila. I moscerini appena emersi vengono selezionati, anestetizzati e posizionati sotto uno stereomicroscopio dotato di fluorescenza. Viene identificato il corpo del fungo che esprime GFP e viene inserito un perno Minutien per causare lesioni. Le mosche sono autorizzate a riprendersi per ulteriori studi.

Fonte: Shandra, O. et al., Induzione di epilessia post-traumatica in un modello murino di lesione cerebrale traumatica diffusa ripetitiva. J. Vis. Exp.

Questo video dimostra l'induzione di una lesione cerebrale traumatica (TBI) in un ratto utilizzando un dispositivo per lesioni a percussione fluida laterale (FPI). La procedura prevede la creazione di un foro nel cranio di un ratto anestetizzato per esporre la dura madre, su cui è attaccata una cannula. Il ratto viene quindi collegato al dispositivo, che genera un'onda di pressione che raggiunge il cervello, imitando il trauma cranico causando la morte delle cellule neurali e il danno...

Fonte: Yang, Z., et.al. Un modello ripetitivo di trauma cranico concussivo nei topi. J. Vis. Exp. (2016). Questo video mostra l'induzione di lesioni cerebrali concussive ripetute in un topo utilizzando un dispositivo a impatto elettromagnetico. La procedura prevede il posizionamento della punta d'impatto tra le suture interfrontali e lambdoidi sul cranio di un topo anestetizzato e l'utilizzo di una punta della sonda per impostare con precisione la profondità d'impatto. L'impatto viene erogato a...

Fonte: Logsdon, A. F., et al. Modello di onda di esplosione a bassa intensità per la valutazione preclinica della lesione cerebrale traumatica lieve a testa chiusa nei roditori. (2020)Questo video dimostra l'induzione di una lieve lesione cerebrale traumatica a testa chiusa in un modello murino utilizzando una configurazione di tubo di shock a gas pressurizzato. L'onda di pressione generata rompe la membrana di poliestere, erogando un'onda d'urto alla testa del topo che provoca un rapido...

Fonte: Macheda, T., et. al. Modello a testa chiusa controllato elettromagneticamente di lieve lesione cerebrale traumatica nei topi. J. Vis. Exp. (2022)Questo video mostra la procedura per indurre una lesione alla testa chiusa in un modello murino utilizzando un frame stereotassico. L'impatto controllato replica la lesione cerebrale traumatica lieve, consentendo ai ricercatori di studiare gli effetti neurologici e il recupero misurando i riflessi e il comportamento post-infortunio.

Fonte: Elzat, E. Y. Y., et al., Definizione di un modello di lesione del midollo spinale da contusione di topo basato su una tecnica minimamente invasiva. J. Vis. Exp. (2022). Questo video mostra il metodo per indurre una lesione da contusione a livello del midollo spinale T9 in un modello murino, utilizzando una piattaforma coassiale per lesioni del midollo spinale. Viene fatto cadere un peso sul midollo spinale a livello T9 che crea una contusione che provoca immediatamente scolorimento e...

Fonte: Lakshman, N., et al. Un test della neurosfera per valutare l'attivazione endogena delle cellule staminali neurali in un modello murino di lesione minima del midollo spinale. J. Vis. Exp. (2018). Questo video mostra l'attivazione e la migrazione delle cellule staminali neurali (NSC) in un modello di lesione del midollo spinale di topo. Per esporre il midollo spinale, una vertebra dalla regione toracica della colonna vertebrale viene rimossa da un topo anestetizzato. Una lesione...

Fonte: Kumar, S., et. al. Modello murino di ulcere da pressione dopo lesione del midollo spinale. J. Vis. Exp. (2019)Questo video dimostra un'induzione dettagliata della lesione del midollo spinale nei topi. Il topo anestetizzato viene sezionato per esporre le vertebre T9-T10 e i loro processi spinosi vengono rimossi. Il midollo spinale esposto viene quindi sezionato per infliggere la lesione. L'area chirurgica viene quindi chiusa e il topo può riprendersi.

Questo video mostra un metodo per valutare l'internalizzazione della proteina bersaglio negli astrociti corticali di topo utilizzando la biotinilazione, seguita dalla lisi cellulare, dall'estrazione di proteine a base di streptavidina, dalla denaturazione e dall'analisi Western blot per confermare il successo dell'internalizzazione.

Questo video mostra un metodo per valutare l'attività proteica utilizzando neuroni ippocampali su zone proteiche modellate. I neuroni mostrano repulsione nelle zone proteiche di prova e attaccamento nelle zone proteiche di controllo, evidenziando gli effetti dell'attività proteica attrattiva o repulsiva.

Questo video dimostra l'induzione del glaucoma in un ratto anestetizzato iniettando soluzione salina ipertonica nella vena episclerale. La soluzione salina entra nella rete trabecolare attraverso il canale di Schlemm, causando cicatrici tissutali, che bloccano il deflusso dell'umore acqueo e aumentano la pressione intraoculare. L'elevata pressione danneggia le cellule gangliari retiniche, portando al glaucoma.

Omogeneizzare il tessuto con un omogeneizzatore per rilasciare proteine, tra cui l'acido glutammico decarbossilasi o le isoforme dell'enzima GAD, essenziali per la funzione cerebrale.

Questo video dimostra la procedura di accesso chirurgico al nervo ottico in un animale anestetizzato e la somministrazione precisa di lisolecitina per indurre la demielinizzazione focale, creando condizioni neuropatologiche per ulteriori studi.

Incubare la fetta in un cRC contenente falsi neurotrasmettitori fluorescenti o FFN.

Questo video dimostra l'induzione di convulsioni indotte dalla manipolazione in un topo infetto dal virus dell'encefalomielite murina di Theiler (TMEV). Il topo infetto, che ha neuroni ipereccitabili, è esposto a stimoli fisici esterni. Questa esposizione provoca stress, portando a un'attività elettrica anormale nei neuroni, che provoca convulsioni.

Questo video mostra la procedura per indurre convulsioni indotte dal calore in un topo transgenico con mutazioni genetiche correlate all'epilessia aumentando gradualmente la temperatura corporea in una camera controllata. Questo protocollo viene utilizzato per studiare i meccanismi convulsivi e le potenziali terapie per l'epilessia.

Questo video dimostra l'induzione di eventi ictali in fette corticali coronali da un topo transgenico che esprime canali cationici attivati dalla luce nei neuroni piramidali eccitatori corticali. La fetta viene posta in una camera di registrazione e un elettrodo di registrazione viene inserito nello strato corticale superficiale. Dopo la perfusione con un farmaco che induce convulsioni che blocca i canali del potassio, i neuroni diventano ipereccitabili e generano eventi ictali spontanei. Per...

Questo video mostra il processo di induzione dell'epilessia nei topi utilizzando iniezioni di pentilenetetrazolo (PTZ), un antagonista del recettore GABA-A. La somministrazione intraperitoneale ripetuta di PTZ abbassa progressivamente la soglia delle crisi inibendo l'afflusso di ioni cloruro, interrompendo la neurotrasmissione inibitoria e portando all'ipereccitabilità nei neuroni che scatenano le convulsioni. Questo processo provoca l'accensione e lo sviluppo di convulsioni spontanee, imitando...

Fonte: Soukupová, M., et al. Microdialisi di amminoacidi eccitatori durante registrazioni EEG in ratti in movimento libero. J. Vis. Exp. (2018)Questo video dimostra la valutazione dei livelli di neurotrasmettitori eccitatori extracellulari nei ratti con induzione di epilessia cronica. Dopo aver impiantato una sonda di microdialisi nel cervello e aver confermato l'assenza di convulsioni utilizzando l'elettroencefalografia (EEG), viene raccolto il liquido extracellulare per valutare i livelli...

Fonte: Schönherr, S., et. al. Immunomarcatura combinata optogenetica e replica di frattura da congelamento per esaminare la disposizione specifica dell'input dei recettori del glutammato nell'amigdala di topo. J. Vis. Exp. (2016)Questo video dimostra l'immunomarcatura di repliche fratturate da congelamento di tessuto cerebrale di topo per la microscopia elettronica. Le repliche fratturate e rivestite vengono digerite per esporre i recettori. Gli anticorpi primari e secondari marcati con oro...

In questo video, le cellule di glioblastoma e microglia vengono miscelate con una soluzione di matrice polimerica e trasferite in un inserto di camera porosa dove si forma un gel, che incorpora le cellule. Le microglia stimolano la migrazione delle cellule di glioblastoma attraverso l'inserto poroso, imitando l'invasione delle cellule tumorali nel tessuto circostante, le cellule vengono quindi fissate e preparate per ulteriori analisi.

In questo video, viene dimostrato un metodo per consentire il trasferimento di mitocondri marcati in fluorescenza in cellule staminali di glioblastoma (GSC) attraverso la centrifugazione. Il successo dell'assorbimento e dell'integrazione funzionale dei mitocondri del donatore sono confermati rilevando la fluorescenza mediante microscopia confocale.

Fonte: Guyon, J., et al. Un modello sferoidale 3D per il glioblastoma. J. Vis. Exp. (2020)Il video dimostra la generazione di un modello sferoidale tridimensionale dell'invasione delle cellule tumorali. Gli sferoidi sono formati da cellule tumorali cerebrali umane e incorporati in una matrice di collagene. Le cellule tumorali alla periferia sferoidale adottano un fenotipo invasivo, secernendo proteasi per degradare il collagene e avanzando per invadere la matrice circostante.

Fonte: Lim, M., et al. Modellazione delle metastasi cerebrali mediante iniezione di cellule tumorali nell'arteria carotide interna. J. Vis. Exp. (2022)In questo video, un topo anestetizzato viene sottoposto a una procedura chirurgica in cui le cellule tumorali vengono iniettate nell'arteria carotide comune (CCA) per facilitare la consegna mirata al cervello. La procedura prevede la sutura e la manipolazione precise delle arterie carotidi per dirigere le cellule iniettate verso l'arteria...

Fonte: Ear, P. H., et. al. Istituzione e caratterizzazione degli sferoidi del tumore neuroendocrino dell'intestino tenue. J. Vis. Exp. (2019)Questo video dimostra la colorazione in immunofluorescenza degli sferoidi dei tumori neuroendocrini dell'intestino tenue. Gli sferoidi vengono fissati, permeabilizzati e bloccati e vengono quindi incubati con anticorpi primari e secondari. Un colorante viene aggiunto ai nuclei colorati prima di montarli e visualizzarli al microscopio a fluorescenza.

Fonte: Mudduluru, G., et. al. Misurazione in tempo reale basata sull'impedenza della migrazione e dell'invasione delle cellule tumorali. J. Vis. Exp. (2020)Questo video dimostra un test basato sull'impedenza per misurare l'invasione e la migrazione delle cellule di glioblastoma. Le cellule degradano la matrice extracellulare, si muovono attraverso le membrane microporose e aderiscono agli elettrodi, generando impedenza. Questa analisi in tempo reale riflette il loro potenziale invasivo per le...

Fonte: Bolcaen, J., et. al., Irradiazione guidata da PET e risonanza magnetica di un modello di ratto con glioblastoma utilizzando un micro-irradiatore. J. Vis. Exp. (2017)Questo video mostra la procedura per stabilire un modello di ratto di glioblastoma iniettando stereotassicamente cellule di glioblastoma che causano tumore cerebrale nella corteccia prefrontale.

Fonte: Mendez, F. M. et al., Immunoprecipitazione della cromatina nativa utilizzando neurosfere tumorali cerebrali mure. J. Vis. Exp. (2018). Questo video dimostra l'isolamento di complessi proteina-DNA da cellule della neurosfera derivate da un tumore cerebrale di topo utilizzando l'immunoprecipitazione nativa della cromatina. Descrive in dettaglio le fasi per la preparazione della cromatina, l'immunoprecipitazione, il lavaggio e la digestione delle proteine per rilasciare il DNA per l'analisi...

Fonte: Núñez, F. J., et al. Valutazione dei biomarcatori nel glioma mediante immunoistochimica su colture di neurosfere di glioma 3D incluse in paraffina. J. Vis. Exp. (2019). Questo video mostra una tecnica immunoistochimica per l'etichettatura di biomarcatori tumorali nelle neurosfere tumorali cerebrali incluse in paraffina. Le sezioni della neurosfera subiscono la rimozione e la reidratazione della paraffina, seguite da un trattamento per esporre i siti dei biomarcatori. Gli anticorpi...