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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Iniezione del nervo ottico
- Anestetizzare l'animale con un'iniezione intraperitoneale di ketamina (75 mg/kg) e medetomidina (0,5 mg/kg).
nota: Dopo l'induzione dell'anestesia, osservare i riflessi di sospensione (pinch test, riflesso corneale e palpebrale, ecc.) e la loro assenza come indicazione per iniziare l'intervento chirurgico. Monitorare continuamente gli animali durante l'intervento chirurgico e somministrare il farmaco anestetico aggiuntivo (10% della dose iniziale di ketamina per rabbocco) se i riflessi sono presenti. Negli esperimenti vengono utilizzati ratti adulti (>12 settimane).
- Radere la pelle dell'area chirurgica. Posizionare l'animale su un tappetino riscaldante (37 °C) per mantenere la temperatura corporea durante l'intervento. Preparare la pelle attraverso l'applicazione topica di iodio povidone. Applicare il drappeggio chirurgico. Applicare un unguento oftalmico topico per prevenire la secchezza corneale in anestesia generale. Mantenere l'asepsi utilizzando strumenti sterili.
- Praticare un'incisione da 1 a 1,5 cm nella pelle sopra l'orbita di un occhio selezionato casualmente. Aprire il tessuto sottocutaneo per raggiungere la cavità orbitale utilizzando le forbici dell'iride fine. Aprire la congiuntiva e la capsula del tenone anteriore al microscopio operatorio.
- Ritrarre i muscoli extraoculari e le ghiandole lacrimali intraorbitali per esporre una lunghezza di circa 3 mm del nervo ottico. Aprire longitudinalmente gli strati di dura madre e materia aracnoidea attorno al nervo ottico utilizzando una lama oftalmica.
- Inserire la pipetta di vetro nel nervo ottico a una distanza di 2 mm posteriormente al globo. La micropipetta di vetro è collegata a una siringa Hamilton.
- Iniettare l'1% di lisolecitina (0,4 - 1,0 μl, con 0,02% di blu di Evan che non ha effetti sulla mielinizzazione) lentamente nel nervo per un periodo di circa 30 secondi.
- Sutura l'incisione cutanea. Applicare un unguento antibiotico per prevenire l'infezione. Gli altri occhi possono essere utilizzati come controlli interni per le registrazioni elettrofisiologiche.
- Posiziona gli animali su un tappetino riscaldante per riprenderti dall'anestesia.