Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Anestesia e preparazione
- Posizionare l'animale nella camera di anestesia e indurre l'anestesia generale tramite isoflurano all'1,8% e 0,9 L/min di ossigeno.
- Confermare un piano di anestesia adeguato attraverso una valutazione della respirazione spontanea e una valutazione della coscienza valutando la risposta dell'animale alla smorfia a un pizzicotto del dito del piede.
- Applicare il lubrificante per gli occhi bilateralmente per proteggerlo dall'irritazione o dalla secchezza corneale.
- Radere il/i sito/i operatorio/i con un rasoio o un tagliacapelli automatico.
- Stabilire un metodo per l'identificazione dei ratti in questo momento, tramite un marchio auricolare o un'etichetta/marcatura della coda.
- Somministrare un'iniezione sottocutanea di 0,05 mg/kg di buprenorfina lungo la schiena dell'animale per la profilassi contro il dolore postoperatorio.
2. Approccio chirurgico e modelli di lesione
- Trasferire l'animale sul tavolo operatorio e continuare il flusso di gas attraverso un ogiva. Assicurarsi che un cuscinetto riscaldante sia posizionato sotto l'animale e il campo sterile per mantenere la sua temperatura corporea.
- Posizionare una garza sterilizzata (arrotolata e fissata con nastro adesivo) sul collo del topo per usarla come paranuca; questo migliorerà l'esposizione del campo chirurgico. Si noti che il posizionamento appropriato dell'animale è fondamentale per un'efficiente identificazione e dissezione dei nervi.
- Preparare la pelle del viso dell'animale per la procedura. Per garantire la disinfezione, strofinare il sito chirurgico tre volte con clorexidina o una soluzione a base di iodio alternata con etanolo al 70%.
- Pianificare e segnare l'incisione chirurgica, se lo si desidera. Manipolare l'orecchio omolaterale in direzione antero-posteriore per determinare il ripiegamento naturale della cute postauricolare.
- Praticare un'incisione di 4-5 mm nella piega postauricolare utilizzando forbici affilate per l'iride o una lama numero 15. Questo può essere ampliato più avanti nella procedura, se necessario.
- Sezionare senza mezzi termini la fascia sottocutanea immediata e posizionare un divaricatore micro-Weitlaner per migliorare l'esposizione. Si noti che potrebbero esserci vasi sanguigni di piccolo calibro in quest'area; Il modo migliore per evitarli è ritrarre in modo superiore o inferiore tramite il divaricatore Weitlaner.
- Identificare il muscolo digastrico anteriore mentre viaggia in una direzione da inferiore a superiore verso il suo inserzione lungo la base del cranio.
- Distribuire delicatamente attraverso il ventre muscolare lungo il suo punto di inserzione per rivelare il tendine del ventre digastrico anteriore. Si noti che il tendine appare come un processo bianco filmoso che emana dal muscolo con un solido inserimento sulla base del cranio.
- Dopo aver identificato il muscolo digastrico anteriore e il suo tendine, regolare il divaricatore di Weitlaner per ritrarre ulteriormente la pancia muscolare. Si noti che la regione successivamente esposta è lo spazio tridimensionale in cui si trova il tronco principale del nervo facciale.
nota: Questa regione è delimitata superiormente e medialmente dalla base del cranio, lateralmente dal muscolo digastrico anteriore, posteromedialmente dal condotto uditivo e inferiormente dalle strutture del collo, compresa l'arteria temporale superficiale.
- Dopo un'adeguata esposizione, identificare il tronco principale del nervo facciale mentre viaggia inferiormente da sotto il tendine del muscolo digastrico, dove esce dal forame stilomastoideo dalla base del cranio. Si noti che il nervo appare come un cordone bianco perlaceo racchiuso nella fascia parotide-masseterica dell'animale. Prestare attenzione quando si espone ulteriormente il nervo per i seguenti motivi.
- Evitare la dissezione aggressiva o le distese perpendicolari, per proteggersi dalla lesione da neuroprassia mediata da stiramento.
- Evitare la dissezione aggressiva diretta posteriormente e medialmente per evitare di violare i tessuti sottili sovrastanti il condotto uditivo, in quanto ciò potrebbe introdurre la flora dell'orecchio medio nel campo chirurgico.
- Evitare di danneggiare l'arteria temporale superficiale attraverso un'ampia dissezione diretta medialmente e inferiormente. Si noti che una lesione sarà identificata da un sanguinamento vivace e pulsante.
- Se l'arteria è ferita, applicare una pressione tempestiva con un applicatore con punta di cotone o una garza sterile tramite una pinza. Gli agenti emostatici o il sigillante liquido di fibrina possono essere posizionati nelle immediate vicinanze. Tieni presente che l'animale può richiedere un'iniezione sottocutanea di soluzione fisiologica sterile allo 0,9% per la stabilizzazione dei fluidi.
- Tracciare il tronco principale distalmente sezionando lungo il nervo in una direzione inferiore, distalmente dall'uscita del forame stilomastoideo.
- Estendere l'incisione originale per esporre completamente il nervo e i suoi rami. Evitare di interrompere la ghiandola parotide, in quanto ciò potrebbe causare il sialocele postoperatorio.
- Indurre i modelli di lesione desiderati come segue.
- Per una lesione da schiacciamento, usa una pinza da gioielliere a superficie liscia per afferrare saldamente il nervo e comprimerlo9. Applicare una pressione costante e riproducibile sul nervo per 30 secondi per garantire un'adeguata lesione da schiacciamento.
- Per una semplice transezione, afferrare la fascia sovrastante il nervo, o l'epinevrio immediato, con una pinza a denti fini, e utilizzare microforbici affilate per sezionare in modo pulito il nervo nel punto desiderato con un solo taglio. Fare attenzione a evitare un'eccessiva trazione sul nervo con il forcipe.
- Per un modello di gap nervoso, creare il gap nervoso desiderato utilizzando un metodo simile alla semplice lesione di transezione. Utilizzare l'asta sterilizzata di un applicatore con punta di cotone tagliata alla lunghezza dello spazio nervoso desiderata intraoperatoriamente per garantire la somiglianza del modello di lesione tra gli animali.
3. Chiusura della ferita
- Irrigare la ferita con soluzione fisiologica sterile e asciugarla con una garza sterile.
- Approssimare i bordi della pelle in modo semplice e sottocuticolare con punti di sutura riassorbibili, oppure utilizzare colla per la pelle o clip per ferite, che sono accettabili anche per la chiusura della ferita. Posiziona un punto sepolto prendendo un morso da profondo a superficiale di un bordo della pelle e poi un successivo morso da superficiale a profondo del bordo opposto della pelle.
