Stabilire un'infezione da HIV attiva in un modello di ratto

Abstract

Fonte: Li, H., McLaurin, et al. Un modello di ratto dell'infezione cerebrale EcoHIV. J. Vis. Exp. (2021).

Questo video dimostra la procedura di iniezione di virus chimerici dell'HIV nella corteccia del cervello di un ratto, dove l'RNA del virus si integra nel genoma dell'ospite, si replica e si diffonde per stabilire un'infezione da HIV attiva nel modello sperimentale.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV Enhanced Green Fluorescent Protein] chirurgia stereotassica del virus

1. Anestetizzare i ratti usando il 3% di sevoflurano. Quando i ratti non rispondono agli stimoli nocivi e i loro riflessi sono assenti, procedere al passaggio 1.2.
2. Radere i peli dalla regione del cervello e sterilizzare la pelle due volte con etanolo al 70% e uno scrub a base di clorexidina. Fissare il ratto in posizione prona nell'apparato stereotassico.
3. Praticare un'incisione (5-6 cm) attraverso la pelle lungo la linea mediana del cuoio capelluto.
4. Segnare due posizioni di foratura a 0,8 mm lateralmente, 1,2 mm rostrale a bregma. Praticare un foro (diametro 0,4 mm) in ogni posizione del cranio.
5. Riempire la soluzione titolata di lentivirus EcoHIV (1,04 × 10⁶ TU/mL) in una siringa per iniezione da 10 μL. Fissare la siringa all'apparato stereotassico.
6. Spostare l'ago verso il basso vicino alla superficie del foro di perforazione. Misura e sposta 2,5 mm di profondità.
7. Infrangere 1 μL di soluzione virale a una velocità di 0,2 μL/min. Tenere l'ago all'interno dell'area di iniezione per 5 minuti. Spostare lentamente l'ago verso l'alto fino a quando non si trova all'esterno del cranio del ratto.
8. Sutura la pelle con un filo di seta 4-0.
9. Sterilizzare l'incisione con etanolo al 70% una volta. Iniettare per via sottocutanea butorfanolo (Dorolex, 0,1 mg/kg di peso corporeo).
10. Trasferisci il ratto in una camera di recupero con un termoforo fino a quando non si sveglia.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Soluzione antibiotico-antimicotica	Cellgro	30004CI	100X
Vetro di copertura	VWR	637-137
trapano
Ethicon Vicryl Plus Antibatterico, 4-0 Polyglactin 910 Sutura, 27in. FS-2	Med Vet Internazionale	VCP422H
Siringa di Hamilton	Hamilton	Anno 1701
Pinze dell'iride	Strumenti di precisione mondiali	Codice: 15914
Forbici per iride	Strumenti di precisione mondiali	500216
Apparato stereotassico	Strumenti Kopf	Modello 900
Forbici Vannas	Strumenti di precisione mondiali	500086